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公开(公告)号：CN118291353A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410536010.0
申请日：2024-04-30
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一株产普鲁兰酶菌株及其构建方法与应用。本发明构建的产普鲁兰酶菌株，是以枯草芽孢杆菌168Δ9为底盘菌株，通过双启动子表达质粒过表达普鲁兰酶基因得到的。所述双启动子是由启动子P43与启动子P43、启动子PHpaⅡ、启动子PLypR、启动子P223、启动子P556、启动子P566、启动子P6366中的任意一种组成，所述的普鲁兰酶基因包括基因amyX、基因pulA、基因pulB、基因pulD、基因Bapul13A中的任意一种。本发明构建得到的产普鲁兰酶菌株可显著提高普鲁兰酶的产量，且胞外积累的酶活更高，通过优化发酵培养基更进一步提高了普鲁兰酶的产量和酶活。减少人工、时间和材料的成本，且无需担心安全问题，可直接用于食品工业方面。
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公开(公告)号：CN108531439B
公开(公告)日：2020-04-07
申请号：CN201810336575.9
申请日：2018-04-16
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌基因工程菌，其导入了携带fimH基因的重组质粒。本发明还公开了基因工程菌的构建方法。本发明进一步地公开了基因工程菌在发酵生产L‑苏氨酸中的应用。本发明通过构建过表达fimH基因的大肠杆菌基因工程菌，使大肠杆菌在发酵产L‑苏氨酸过程中生物膜产量提高，并且黏附性增加，菌群数量增加，提高了L‑苏氨酸的产量和糖转化率，缩短了发酵周期。
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公开(公告)号：CN110129245A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910309103.9
申请日：2019-07-08
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株敲除胞外核酸酶ExeP的谷氨酸棒杆菌，该菌株中胞外核酸酶基因ExeP失活，所述的谷氨酸棒杆菌为谷氨酸棒杆菌ATCC13032，所述胞外核酸酶ExeP的基因序列如SEQ ID NO.1所示，失活后的胞外核酸酶ExeP的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过敲除敲除胞外核酸酶ExeP，减少胞外DNA的降解，加强了谷氨酸棒杆菌的成膜能力，利用本发明构建的敲除胞外核酸酶ExeP的谷氨酸棒杆菌发酵产脯氨酸，提高了脯氨酸连续化发酵的产量，缩短了发酵周期。
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公开(公告)号：CN110079567A
公开(公告)日：2019-08-02
申请号：CN201910392765.7
申请日：2019-05-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种过表达fimH基因的重组大肠杆菌在发酵生产氨基酸中的应用。本发明借鉴医学上的致病性大肠杆菌形成生物膜的细胞相较于游离的细胞更适应极端环境，在已知fim操纵子调控的fimH基因可以调控大肠杆菌生物膜的形成，通过转录组分析发现了过表达fimH基因后氨基酸代谢通路的变化，为后期工业化过程中筛选其他高产氨基酸有机酸的重组菌株做好铺垫，最终达到提高产量、发酵速率和糖转化率的目的。
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公开(公告)号：CN109628336A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201910043699.2
申请日：2019-01-17
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C07K14/395 , C12N15/81 , C12P7/06
Abstract: 本发明公开了一株敲除FBP1基因的酿酒酵母基因工程菌，属于微生物基因工程领域。本方法利用金担子素抗性标记AurR基因构建了FBP1基因敲除组件并成功转化酿酒酵母酵母菌株。本发明还公开了基因工程菌的构建方法。本发明进一步地公开了基因工程菌在固定化发酵生产模型中的应用。本发明使酿酒酵母在游离发酵中絮凝特性明显减弱，在固定化发酵中形成的生物被膜减少，黏附性降低，游离细胞明显增多。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119876298A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202510075277.9
申请日：2025-01-17
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明涉及一种制备β‑环糊精的方法，具体涉及一种固定化连续催化生产β‑环糊精的方法。本发明基于固定化技术，同时通过优化催化条件如时间、温度和pH值，并在菌体生长阶段添加单氰胺，实现了在不灭菌的条件下，即可多批次的固定化连续催化生产β‑环糊精，并在连续反应过程中，保持了高酶活性和高产物转化率。实验结果表明，该方法在非灭菌条件下进行多批次固定化催化时，酶活性和产物转化率均表现出良好的稳定性和可重复性。相比传统方法，本发明不仅简化了操作步骤，降低了生产成本，同时提高了生产效率和产品质量，具有广泛的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN119639640A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202411724504.8
申请日：2024-11-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种表面展示普鲁兰酶的重组菌及其构建方法与应用。以枯草芽孢杆菌为底盘菌株，利用淀粉样纤维蛋白tasA或分选酶锚定普鲁兰酶，构建得到了一种表面展示普鲁兰酶的重组菌。利用该重组菌株在连续发酵、连续催化生产普鲁兰酶中，无需提取和纯化胞外普鲁兰酶，无需再利用物理或者化学方法进行酶固定化，大幅度减少了多步操作过程中带来的酶活损失，并且该方法结合生物膜连续化发酵的优点使得表面展示酶活复苏，不会像传统固定化方式酶活越来越低。带来高收益，低成本，节约资源，减少环境污染等优点，该方法也为以后普鲁兰酶的催化提供新思路。
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公开(公告)号：CN116622605A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310468440.9
申请日：2023-04-27
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用。本发明利用CRISPR/cas9技术，先构建出了敲除产孢膜丝氨酸蛋白酶htrC和碱性丝氨酸蛋白酶aprX的出发菌株B.S168△2，再以出发菌株B.S168△2为基础，构建出了八种敲除胞外蛋白酶基因的底盘细胞B.S168△3、B.S168△4、B.S168△5、B.S168△6、B.S168△7、B.S168△8、B.S168△9和B.S168△10，并进一步筛选出了无抗性残留，转化效率高、几乎无胞外蛋白酶且不会影响胞外目的蛋白积累的底盘细胞B.S168△8、B.S168△9和B.S168△10，随后在此基础上又筛选出了最适合分泌表达普鲁兰酶的底盘菌株B.S168△9，构建出的重组菌株B.S168△9amyX相比于原始菌株B.S168的酶活有显著提升。
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公开(公告)号：CN110129245B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201910309103.9
申请日：2019-07-08
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株敲除胞外核酸酶ExeP的谷氨酸棒杆菌，该菌株中胞外核酸酶基因ExeP失活，所述的谷氨酸棒杆菌为谷氨酸棒杆菌ATCC13032，所述胞外核酸酶ExeP的基因序列如SEQ ID NO.1所示，失活后的胞外核酸酶ExeP的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过敲除敲除胞外核酸酶ExeP，减少胞外DNA的降解，加强了谷氨酸棒杆菌的成膜能力，利用本发明构建的敲除胞外核酸酶ExeP的谷氨酸棒杆菌发酵产脯氨酸，提高了脯氨酸连续化发酵的产量，缩短了发酵周期。
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公开(公告)号：CN110055205B
公开(公告)日：2020-09-01
申请号：CN201910393054.1
申请日：2019-05-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种敲除fimH基因的重组大肠杆菌，该大肠杆菌fimH基因失活。本发明进一步提供敲除fimH基因的重组大肠杆菌的构建方法及该重组大肠杆菌在发酵生产氨基酸或有机酸中的应用。本发明借鉴医学上的致病性大肠杆菌形成生物膜的细胞相较于游离的细胞更适应极端环境，在已知fim操纵子调控的fimH基因可以调控大肠杆菌生物膜的形成，通过转录组分析发现了敲除fimH基因后氨基酸及有机酸代谢通路的变化，为后期工业化过程中筛选其他高产氨基酸有机酸的重组菌株做好铺垫，最终达到提高产量、发酵速率和糖转化率的目的。
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