公开(公告)号：CN107164436B

公开(公告)日：2020-10-13

申请号：CN201710333064.7

申请日：2017-05-12

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 赵林果 ,  裴建军 ,  解静聪 ,  赵顺懿 ,  房仙颖 ,  陈安娜

IPC: C12P19/60 ,  C12P19/14 ,  A61K31/7048 ,  A61P35/00

Abstract: β‑葡萄糖苷酶在转化淫羊藿总黄酮制备宝霍苷I中的应用。该方法是利用一种特异的β‑葡萄糖苷酶定向转化淫羊藿总黄酮，使淫羊藿总黄酮中含量丰富的多个组分都转化为宝霍苷I。本发明筛选获得的一种β‑葡萄糖苷酶，不仅能高效地酶解淫羊藿总黄酮中富含的淫羊藿苷、朝霍定A、箭藿苷A制得宝霍苷I，而且能特异地将朝霍定B和箭藿苷B制得宝霍苷I。本发明酶使用成本低，只需一种酶；总黄酮的转化效率高，摩尔转化率大于95%。而且所制备的宝霍苷I对乳腺癌、肝癌、结肠癌、肺癌等肿瘤增殖的抑制作用等方面的药理学活性显著高于淫羊藿总黄酮中其它的主要淫羊藿苷。

公开(公告)号：CN107164436A

公开(公告)日：2017-09-15

申请号：CN201710333064.7

申请日：2017-05-12

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 赵林果 ,  裴建军 ,  解静聪 ,  赵顺懿 ,  房仙颖 ,  陈安娜

IPC: C12P19/60 ,  C12P19/14 ,  A61K31/7048 ,  A61P35/00

Abstract: β‑葡萄糖苷酶在转化淫羊藿总黄酮制备宝霍苷I中的应用。该方法是利用一种特异的β‑葡萄糖苷酶定向转化淫羊藿总黄酮，使淫羊藿总黄酮中含量丰富的多个组分都转化为宝霍苷I。本发明筛选获得的一种β‑葡萄糖苷酶，不仅能高效地酶解淫羊藿总黄酮中富含的淫羊藿苷、朝霍定A、箭藿苷A制得宝霍苷I，而且能特异地将朝霍定B和箭藿苷B制得宝霍苷I。本发明酶使用成本低，只需一种酶；总黄酮的转化效率高，摩尔转化率大于95%。而且所制备的宝霍苷I对乳腺癌、肝癌、结肠癌、肺癌等肿瘤增殖的抑制作用等方面的药理学活性显著高于淫羊藿总黄酮中其它的主要淫羊藿苷。

公开(公告)号：CN106318957B

公开(公告)日：2019-05-07

申请号：CN201610945270.9

申请日：2016-10-26

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 赵林果 ,  葛林 ,  石学佳 ,  裴建军 ,  吴涛 ,  陈安娜

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/24 ,  C12P19/60

Abstract: 土曲霉CCF 3059 α‑L‑鼠李糖苷酶突变体及其应用，包括如SEQ ID NO:2所示的D594Q基因、SEQ ID NO:3所示的D594R基因、SEQ ID NO:4所示的D594C基因、SEQ ID NO:5所示的G827K基因、SEQ ID NO:6所示的G827M基因和SEQ ID NO:7所示的G828A基因。突变酶MRha‑D594Q最适温度和原酶MRha均为65℃；但与原酶MRha相比，突变酶MRha‑D594Q在70℃和75℃时仍保持较高的酶活性；添加山梨醇能够进一步提高突变酶MRha‑D594Q的热稳定性，在70℃的半衰期提高了7.8倍。

公开(公告)号：CN108795919A

公开(公告)日：2018-11-13

申请号：CN201810549433.0

申请日：2018-05-31

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 裴建军 ,  赵林果 ,  陈安娜

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/44 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/90 ,  C07K2319/00 ,  C12P19/44 ,  C12Y501/03

Abstract: 一种催化制备UDP‑鼠李糖的融合酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明获得了一种能实现辅酶自循环而催化UDP‑葡萄糖生成UDP‑鼠李糖的融合酶VvRHM‑NRS，在反应体系中只需在起始阶段添加少量的NAD+，无需加入NADPH，就可生成UDP‑鼠李糖，这是首次能实现辅酶自循环而合成UDP‑鼠李糖。

公开(公告)号：CN108795919B

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN201810549433.0

申请日：2018-05-31

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 裴建军 ,  赵林果 ,  陈安娜

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/44 ,  C12R1/19

Abstract: 一种催化制备UDP‑鼠李糖的融合酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明获得了一种能实现辅酶自循环而催化UDP‑葡萄糖生成UDP‑鼠李糖的融合酶VvRHM‑NRS，在反应体系中只需在起始阶段添加少量的NAD+，无需加入NADPH，就可生成UDP‑鼠李糖，这是首次能实现辅酶自循环而合成UDP‑鼠李糖。

公开(公告)号：CN108220260A

公开(公告)日：2018-06-29

申请号：CN201711304614.9

申请日：2017-12-11

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 裴建军 ,  赵林果 ,  董萍 ,  陈安娜

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19

Abstract: 一种催化柚皮素生成山萘酚的融合酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。本发明通过组合筛选策略获得能有效催化柚皮素生成山萘酚的黄烷酮3‑羟化酶（PeF3H）和黄酮醇合成酶（CuFLS），是目前报道的最佳组合。通过连接肽的筛选，获得了能适合PeF3H和CuFLS功能化融合的连接肽TPTPTPTP，通过该连接肽构建的融合酶（F69）能高效催化柚皮素生成山萘酚。携带该融合酶（F69）的重组菌BL21‑F69，通过高密度发酵，山萘酚的产量达到1010.2 mg/L，是目前报道最高产量的17倍。

公开(公告)号：CN106318957A

公开(公告)日：2017-01-11

申请号：CN201610945270.9

申请日：2016-10-26

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 赵林果 ,  葛林 ,  石学佳 ,  裴建军 ,  吴涛 ,  陈安娜

IPC: C12N15/56 ,  C12N9/24 ,  C12P19/60

CPC classification number: C12N9/2402 ,  C12P19/60 ,  C12Y302/0104

Abstract: 土曲霉CCF 3059 α-L-鼠李糖苷酶突变体及其应用，包括如SEQ ID NO:2所示的D594Q基因、SEQ ID NO:3所示的D594R基因、SEQ ID NO:4所示的D594C基因、SEQ ID NO:5所示的G827K基因、SEQ ID NO:6所示的G827M基因和SEQ ID NO:7所示的G828A基因。突变酶MRha-D594Q 最适温度和原酶MRha均为65℃；但与原酶MRha相比，突变酶MRha-D594Q在70℃和75℃时仍保持较高的酶活性；添加山梨醇能够进一步提高突变酶MRha-D594Q的热稳定性，在70℃的半衰期提高了7.8倍。

公开(公告)号：CN108220260B

公开(公告)日：2021-06-08

申请号：CN201711304614.9

申请日：2017-12-11

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 裴建军 ,  赵林果 ,  董萍 ,  陈安娜

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19

Abstract: 一种催化柚皮素生成山萘酚的融合酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。本发明通过组合筛选策略获得能有效催化柚皮素生成山萘酚的黄烷酮3‑羟化酶（PeF3H）和黄酮醇合成酶（CuFLS），是目前报道的最佳组合。通过连接肽的筛选，获得了能适合PeF3H和CuFLS功能化融合的连接肽TPTPTPTP，通过该连接肽构建的融合酶（F69）能高效催化柚皮素生成山萘酚。携带该融合酶（F69）的重组菌BL21‑F69，通过高密度发酵，山萘酚的产量达到1010.2 mg/L，是目前报道最高产量的17倍。