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公开(公告)号：CN118240790B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202410334541.1
申请日：2024-03-22
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶的氨基酸突变体及其应用，所述氨基酸突变体是将来源于黍Panicum hallii GT 1家族的糖基转移酶PhUGT氨基酸序列的第141位脯氨酸替换为甘氨酸获得；所述氨基酸突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过基因工程技术，对具有优良特性或具有一定转木糖基能力的葡萄糖基转移酶实施定向改造，通过单点突变法获得能高效转化芹菜素为芹菜素5‑O‑木糖苷的方法。本发明获得的新型氨基酸突变体专一性强，定向转化效率高，且创制了非天然的黄酮糖苷类化合物芹菜素5‑O‑木糖苷及其制备工艺。
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公开(公告)号：CN118308332A
公开(公告)日：2024-07-09
申请号：CN202410439131.3
申请日：2024-04-12
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组酶VthBga突变体及其应用。本发明对来源于火山鬃菌属嗜热菌(Vulcanisaeta thermophila)GH 1家族的β‑半乳糖苷酶进行了突变，筛选获得了优良的氨基酸突变体。所述氨基酸突变体含有2个突变位点，其中ALA266突变为G，PHE441突变为T。获得的新型β‑半乳糖苷酶能够特异性定向转化酪醇生成半乳糖型红景天苷，且转化率提高了约2.4倍。该生物转化反应酶最适反应温度高，有利于提高底物的溶解度，同时，能够在短时间内安全、高效地催化酪醇转化为半乳糖型红景天苷。本发明为高活性、高附加值的半乳糖型红景天苷的制备提供了独特高效的生物催化剂及其转化工艺。
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公开(公告)号：CN108384769B
公开(公告)日：2021-09-10
申请号：CN201810111588.6
申请日：2018-02-05
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种耐高温复合酶及其应用，由β‑葡萄糖苷酶与β‑木糖苷酶组成。本发明提供的复合酶专一性强，且能够完全转化黄芪甲苷，使得环黄芪醇的转化回收率提高。本发明整个工艺完成时间不超过3 h，大大缩短了环黄芪醇的制备工艺，提高了生产效率；且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂，降低了环境污染；该两种酶均可以自制，生产成本大大降低，适宜于工业化生产。
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公开(公告)号：CN106318957B
公开(公告)日：2019-05-07
申请号：CN201610945270.9
申请日：2016-10-26
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 土曲霉CCF 3059 α‑L‑鼠李糖苷酶突变体及其应用，包括如SEQ ID NO:2所示的D594Q基因、SEQ ID NO:3所示的D594R基因、SEQ ID NO:4所示的D594C基因、SEQ ID NO:5所示的G827K基因、SEQ ID NO:6所示的G827M基因和SEQ ID NO:7所示的G828A基因。突变酶MRha‑D594Q最适温度和原酶MRha均为65℃；但与原酶MRha相比，突变酶MRha‑D594Q在70℃和75℃时仍保持较高的酶活性；添加山梨醇能够进一步提高突变酶MRha‑D594Q的热稳定性，在70℃的半衰期提高了7.8倍。
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公开(公告)号：CN109402154A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811176765.5
申请日：2018-10-10
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种利用协同调控策略提高重组菌产异荭草苷产量的方法，以携带碳苷糖基转移酶Gt6CGT基因的重组菌为基础，通过导入基因调控UDP-glucose的供应、优化诱导转化策略、控制乙酸积累来大幅提高重组菌产异荭草苷的产量。利用本发明的策略，重组菌BL21-CGT-III异荭草苷产量达到了1371 mg/L，底物的摩尔转化率达到97.4%，是目前最高产量的40倍，且本发明所述制备异荭草苷的工艺简单。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108795919A
公开(公告)日：2018-11-13
申请号：CN201810549433.0
申请日：2018-05-31
Applicant: 南京林业大学
CPC classification number: C12N9/90 , C07K2319/00 , C12P19/44 , C12Y501/03
Abstract: 一种催化制备UDP‑鼠李糖的融合酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明获得了一种能实现辅酶自循环而催化UDP‑葡萄糖生成UDP‑鼠李糖的融合酶VvRHM‑NRS，在反应体系中只需在起始阶段添加少量的NAD+，无需加入NADPH，就可生成UDP‑鼠李糖，这是首次能实现辅酶自循环而合成UDP‑鼠李糖。
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公开(公告)号：CN108467858A
公开(公告)日：2018-08-31
申请号：CN201810110773.3
申请日：2018-02-05
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种α-L-鼠李糖苷酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次克隆并重组表达能特异性降解α-1,2糖苷键的α-L-鼠李糖苷酶BtRha，弥补了α-L-鼠李糖苷酶水解鼠李糖与鼠李糖之间的α-1,2糖苷键的空白；该酶能高效特异性降解朝霍定C转化为淫羊藿苷，在酶用量1.5 U/mL，pH 5.5，55℃的条件下水解1 g/L的朝霍定C 90 min,摩尔转化率高达90.5%以上。
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公开(公告)号：CN107641621A
公开(公告)日：2018-01-30
申请号：CN201710448315.6
申请日：2017-06-14
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及酶工程及生物医药技术领域，尤其涉及一种糖苷酶组合物及酶法制备淫羊藿苷元的方法。本发明筛选获得了一种能有效降解淫羊藿苷母核结构上鼠李糖残基的α-L-鼠李糖苷酶及能高效降解其母核结构中葡萄糖残基耐高温β-葡萄糖苷酶，随后通过双酶转化高效制备具有完全保持原有生物活性的淫羊藿苷元。本发明提供的组合物中，两种糖苷酶的最适反应温度都较高，底物溶解性较好，不需要助溶剂；并且酶解时间短，得率高。实验表明，采用本发明提供的糖苷酶组合物对淫羊藿苷进行酶解，摩尔转化率为98.3％，淫羊藿苷元的得率为90％。
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公开(公告)号：CN104312996B
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201410504753.6
申请日：2014-09-26
Applicant: 南京林业大学
Abstract: α-L-鼠李糖苷酶Rha1及其表达基因和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.2 所示；编码所述 α-L-鼠李糖苷酶Rha1的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示。该α-L-鼠李糖苷酶在酶用量13U/mL，pH 6.5，35℃的条件下水解1.5 g/L的芦丁20 min,水解效率高达98%以上；该酶能在低温下生物催化和转化芦丁、柚皮苷等黄酮类化合物，大大降低了能耗。
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公开(公告)号：CN105695552A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610219039.1
申请日：2016-04-08
Applicant: 南京林业大学
CPC classification number: C12P33/20 , C12N9/2402 , C12N9/2445 , C12Y302/01021 , C12Y302/0104
Abstract: 一种酶法制备稀有人参皂苷Rh1的方法，利用来源于Thermotoga petrophila的β-葡萄糖苷酶和黑曲霉(Aspergillus niger)的α-鼠李糖苷酶，降解人参皂苷Re生产Rh1。本发明通过酶法催化人参皂苷Re生产稀有人参皂苷Rh1，生成的稀有人参皂苷Rh1纯度高，没有副产物。酶法转化的效率高，摩尔得率达到95％。
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