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公开(公告)号：CN118006690A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410035165.6
申请日：2024-01-10
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/866 , A61K39/295 , A61K39/215 , A61P31/14 , C12N15/62 , C07K19/00 , G01N33/569
Abstract: 本发明属于基因工程和疫苗开发技术领域，公开了三种猪致病性冠状病毒主要保护性蛋白串联表达载体的构建及应用，选取PEDV、PDCoV、TGEV的中和抗原表位基因，按一定顺序与pFastBacHTA昆虫表达载体连接，通过对不同位点的酶切及测序验证是否串联成功；而后通过重组杆状病毒真核表达系统对串联基因进行融合蛋白表达，以间接免疫荧光、Western Blot验证融合蛋白表达效果；将表达融合蛋白的重组病毒免疫小鼠并通过间接免疫荧光验证其免疫原性；并以串联重组病毒感染Sf9细胞后获得的病变细胞的破碎上清作为包被抗原，建立了针对三种冠状病毒主要保护性蛋白的ELISA检测方法。本发明为预防致猪腹泻的三种冠状病毒提供了一种行之有效的方法，为冠状病毒新型疫苗的开发提供了新思路。
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公开(公告)号：CN117070561A
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202310990340.2
申请日：2023-08-08
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征重组毒株、其构建方法及应用。所述重组病毒基因片段具体包括PRRSV JS2021NADC34毒株的5’UTR基因、编码非结构蛋白基因、3’UTR‑polyA基因和根据PRRSV CH‑1R毒株的编码结构蛋白的基因设计的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示的基因，所述PRRSV JS2021NADC34毒株的编码非结构蛋白基因包括ORF1a和ORF1b基因；PRRSV CH‑1R毒株编码结构蛋白的基因包括ORF2a、ORF2b、ORF3、ORF4、ORF5、ORF5a、ORF6和ORF7基因。本发明公开的重组猪繁殖与呼吸综合征重组毒株解决了NADC34无法在Marc145细胞上增殖的问题，该病毒能够高效稳定增殖、具有较高的滴度和免疫原性、并可区别于野生毒株。本发明公开的重组毒株作为疫苗株使用时，表现出较好的安全性和免疫攻毒保护效果，具有广泛的交叉保护效果，保护率为100％。
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公开(公告)号：CN112014561B
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN202010914249.9
申请日：2020-09-03
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569
Abstract: 本发明涉及猪圆环病毒4型特异的抗原在制备检测猪圆环病毒4型抗体的试剂盒中的应用及试剂盒，属于免疫检测技术领域。本发明提供了猪圆环病毒4型特异的抗原在制备检测猪圆环病毒4型抗体的试剂盒中的应用，所述猪圆环病毒4型特异的抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述应用制备得到的试剂盒检测特异性好，通量高，具有重要的临床使用价值，且检测快速，精准，能够实现猪场中PCV4的流行病学检测，也可以用于疫苗免疫后猪血清中PCV4抗体的评价。
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公开(公告)号：CN112760320A
公开(公告)日：2021-05-07
申请号：CN202011394290.4
申请日：2020-12-02
Applicant: 扬州大学
Inventor： 金文杰 , 朱亭帆 , 钱金涵 , 沈子君 , 秦爱建 , 邵红霞 , 钱琨 , 叶建强 , 刘金彪 , 王倩倩 , 王建 , 王姣 , 柴文娴 , 周小兵 , 邓建中 , 郑建高
IPC: C12N15/113 , C12N5/10 , A61K31/713 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于基因工程和生物制品研究领域，具体涉及有效抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的外源性人工miRNA，所述外源性人工miRNA是下述1)或2)的双链核苷酸：1)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；2)正义链和反义链的序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。与针对PEDV蛋白编码基因的siRNA相比，本发明筛选的针对病毒N基因保守序列的人工miRNA能抑制PEDV复制，不仅可作为抗PEDV的新型生物制剂进行开发，而且可用于抗病猪品系培育。
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公开(公告)号：CN112014561A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010914249.9
申请日：2020-09-03
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569
Abstract: 本发明涉及猪圆环病毒4型特异的抗原在制备检测猪圆环病毒4型抗体的试剂盒中的应用及试剂盒，属于免疫检测技术领域。本发明提供了猪圆环病毒4型特异的抗原在制备检测猪圆环病毒4型抗体的试剂盒中的应用，所述猪圆环病毒4型特异的抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述应用制备得到的试剂盒检测特异性好，通量高，具有重要的临床使用价值，且检测快速，精准，能够实现猪场中PCV4的流行病学检测，也可以用于疫苗免疫后猪血清中PCV4抗体的评价。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118086305A
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410322987.2
申请日：2024-03-21
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , A61K31/713 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于基因工程和疫苗开发研究技术领域，具体涉及一种抑制猪轮状病毒的amiRNA及其应用。本发明提供了一种抑制猪轮状病毒的amiRNA，包括amiRNA‑323或amiRNA‑345。本发明所提供的amiRNA能够有效抑制猪轮状病毒，特别是PORV‑GD‑01‑2015毒株，经实施例验证，本发明所提供的amiRNA能有效抑制猪轮状病毒PORV‑GD‑01‑2015毒株的复制和增殖，也可与抗病毒药物联合使用并用于猪轮状病毒抗病体系的培育，为amiRNA疫苗开发治疗猪轮状病毒提供了一种行之有效的方法，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN110607402B
公开(公告)日：2023-01-03
申请号：CN201910961479.8
申请日：2019-10-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/686 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪传染性胃肠炎病毒PLA检测试剂盒。所述试剂盒包括(1)两株生物素标记的抗体：抗TGEV抗体1A2、抗TGEV抗体2B1；(2)探针；(3)连接液；(4)PCR mix：Universal PCR Assay、2×Fast Master Mix。将两株生物素标记的针对猪传染性胃肠炎病毒SA蛋白的特异性单克隆抗体稀释到工作浓度、与探针孵育进行连接，最后采用实时定量PCR扩增目的单链DNA，成功检测到猪传染性胃肠炎病毒。本发明解决了现有技术时间长、工作量大、灵敏度低、非特异性、操作复杂等缺陷；具有不涉及放射性物质，试剂与样品消耗量小，灵敏度高，无需特殊设备，操作简单的优点。
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公开(公告)号：CN110607402A
公开(公告)日：2019-12-24
申请号：CN201910961479.8
申请日：2019-10-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/686 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪传染性胃肠炎病毒PLA检测试剂盒。所述试剂盒包括(1)两株生物素标记的抗体：抗TGEV抗体1A2、抗TGEV抗体2B1；(2)探针；(3)连接液；(4)PCR mix：Universal PCR Assay、2×Fast Master Mix。将两株生物素标记的针对猪传染性胃肠炎病毒SA蛋白的特异性单克隆抗体稀释到工作浓度、与探针孵育进行连接，最后采用实时定量PCR扩增目的单链DNA，成功检测到猪传染性胃肠炎病毒。本发明解决了现有技术时间长、工作量大、灵敏度低、非特异性、操作复杂等缺陷；具有不涉及放射性物质，试剂与样品消耗量小，灵敏度高，无需特殊设备，操作简单的优点。
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公开(公告)号：CN103820571A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201310727102.9
申请日：2013-12-25
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2531/113 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明涉及一种用于甲型流感病毒一步反转录定量PCR检测方法的引物、探针及试剂盒。所述引物序列如SEQ？ID？NO.1和2所示，所述探针为SEQ？ID？NO.3和4。采用上述引物和探针可通过一步法FRET-PCR技术对甲型流感病毒进行检测。多数现有的检测流感病毒的技术为二步法，包括以随机引物介导的反转录（第一步）和随后的PCR（第二步）。此法使用随机引物，会产生大量的背景核酸，降低反转录效率，同时产生的背景核酸会降低PCR的效率。一步法基于特异引物的反转录系统，效率高，易操作，减少污染机会，从而极大提高了PCR的扩增效率。
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公开(公告)号：CN118086305B
公开(公告)日：2024-12-10
申请号：CN202410322987.2
申请日：2024-03-21
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , A61K31/713 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于基因工程和疫苗开发研究技术领域，具体涉及一种抑制猪轮状病毒的amiRNA及其应用。本发明提供了一种抑制猪轮状病毒的amiRNA，包括amiRNA‑323或amiRNA‑345。本发明所提供的amiRNA能够有效抑制猪轮状病毒，特别是PORV‑GD‑01‑2015毒株，经实施例验证，本发明所提供的amiRNA能有效抑制猪轮状病毒PORV‑GD‑01‑2015毒株的复制和增殖，也可与抗病毒药物联合使用并用于猪轮状病毒抗病体系的培育，为amiRNA疫苗开发治疗猪轮状病毒提供了一种行之有效的方法，具有良好的应用前景。
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