甜瓜的遗传转化方法和应用
    1.
    发明公开

    公开(公告)号:CN119320797A

    公开(公告)日:2025-01-17

    申请号:CN202411470191.8

    申请日:2024-10-21

    Abstract: 本发明提供了一种甜瓜的遗传转化方法和应用。其中,所述遗传转化方法,包括:将经侵染的甜瓜外植体与农杆菌工程菌在无糖培养基中进行共培养处理,其中,所述无糖培养基中不含有可溶性糖。使用上述方法可以将共培养时间延长至7~9天,可以显著提高农杆菌的侵染效率,并且可以减缓农杆菌的生长,避免芽诱导过程的农杆菌污染,同时降低共培养过程外植体的免疫反应,进一步提高了遗传转化效率。与采用现有的含糖培养基的共培养时间持续4天的甜瓜遗传转化方法相比,本发明提供的上述遗传转化方法采用无糖培养基并将共培养时间延长到8天,可以使甜瓜转基因效率提高14倍以上。本发明还提供一种上述遗传转化方法在制备甜瓜遗传转化产品中的应用。

    在甜瓜毛状根中验证CRISPR或Cas9载体活性及基因功能的方法

    公开(公告)号:CN119082175A

    公开(公告)日:2024-12-06

    申请号:CN202411240080.8

    申请日:2024-09-05

    Abstract: 本发明公开了在甜瓜毛状根中验证CRISPR或Cas9载体活性及基因功能的方法,使用萌发两天的甜瓜种子的子叶作为外植体,利用发根农杆菌K599进行侵染,经过共培养,毛状根诱导,以绿色荧光蛋白eGFP作为转基因毛状根的筛选标记,可在1个月左右获得转化CRISPR/Cas9载体的毛状根。利用该转化材料,我们分析了多个基因的基因编辑靶位点的可用性,发现增加sgRNA表达单元拷贝数对于基因编辑效率具有促进作用,并且我们发现CmRHL1被编辑后,甜瓜根毛不能形成。因此,本发明为验证CRISPR/Cas9载体活性以及研究基因在根发育过程中的功能,提供了一种方便、快捷的途径,对于甜瓜的稳定遗传转化方法是一个有利补充。

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