公开(公告)号：CN114814012B

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202210385369.3

申请日：2022-04-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王凤芹 ,  开丽霞 ,  汪以真 ,  路则庆 ,  程远之

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/34 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明公开一种饲料中林可胺类抗生素的测定方法。本发明采用80%甲醇磷酸氢二钾溶液对饲料中3种林可胺类抗生素（林可霉素、克林霉素和吡利霉素）进行提取，并采用混合型阳离子交换（MCX）固相萃取小柱对试样进行净化。通过液相色谱串联质谱法（LC‑MS/MS）对林可霉素、克林霉素和吡利霉素进行同时定量。结果表明，在40~4000μg kg‑1的添加水平下，7种饲料中林可胺类的平均回收率在81.5%~103.3%之间，日内和日间相对标准偏差小于10%。饲料中的检出限（LOD）和定量限（LOQ）在3.6~9.8μg kg‑1和11.4~31.3μg kg‑1之间。该方法适用于同时测定饲料中林可霉素、克林霉素和吡利霉素3种抗生素。本发明准确灵敏，操作简便，稳定性好。

公开(公告)号：CN111855834A

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN202010534544.1

申请日：2020-06-12

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王凤芹 ,  汪以真 ,  曹进平 ,  程远之 ,  路则庆

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/34 ,  G01N30/36 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明公开了一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法。富硒蛋白多糖中加入双氧水和盐酸在水浴条件下进行消解，所得到的SeO32-定容后直接用高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP-MS）进行测定。消解过程完成对硒化合物的氧化还原反应，操作简单，样品不需要在多个容器中进行转移；对样品的消解避免使用了混合酸，同时大大减少了酸的用量；避免了强氧化还原性酸对实验室环境的污染，同时可防止硒的挥发损失，得到较高回收率；避免pH值的调节，操作快速；消解时间短，约60分钟可以完成。

公开(公告)号：CN105602997B

公开(公告)日：2017-07-25

申请号：CN201610000452.9

申请日：2016-01-04

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  宋德广 ,  路则庆 ,  王凤芹 ,  程远之 ,  李笑笑

IPC: C12P3/00 ,  A23K20/20 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12P3/00 ,  A23L33/16 ,  C01B19/02

Abstract: 本发明公开了Enterobacter cloacae制备生物纳米单质硒的方法及应用。一种Enterobacter cloacae制备生物纳米单质硒的方法，以亚硒酸盐为原料，以Enterobacter cloacae Z0206为发酵菌，发酵生产生物纳米单质硒；包括以下步骤：（1）活化的Enterobacter cloacae 接种于发酵培养基中，加入亚硒酸钠溶液；（2）振荡培养；（3）收集发酵液处理得到生物纳米单质硒或者生物纳米单质硒‑多糖复合物。本发明对于制备的各种参数和条件等做了优化，克服了产品潜在的缺陷和生产的不确定性，易于大规模的应用和生产。本发明制备的生物纳米单质硒或者复合物添加至猪饲料中替代亚硒酸钠，达到促进生长，改善抗氧化功能和免疫功能的效果。

公开(公告)号：CN115452974B

公开(公告)日：2024-03-29

申请号：CN202211005491.X

申请日：2022-08-22

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王凤芹 ,  汪以真 ,  路则庆 ,  程远之

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/34 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明公开了一种测定饲料中大观霉素的方法。试样中大观霉素用2%三氯乙酸水溶液（含0.4%乙二胺四乙酸二钠）提取，提取液经调节pH值至4.7±0.2，由混合型阳离子固相小柱净化，采用HILIC色谱柱分离，液相色谱质谱‑质谱联用法测定，基质匹配外标法定量。结果表明：本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法对饲料中大观霉素检出限为1.0 mg/kg，定量限为2.0 mg/kg。不同饲料基质中大观霉素浓度在0.1~10.0μg/mL范围内线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.99。大观霉素的回收率为91.3%~104.2%，相对标准偏差（RSD）为1.5%~9.4%。本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法灵敏、可靠，可应用于饲料中大观霉素的准确测定。

公开(公告)号：CN114686395A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202111405935.4

申请日：2021-11-24

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  程远之 ,  杜满 ,  颜溶 ,  曹进平 ,  王凤芹 ,  路则庆

IPC: C12N1/20 ,  C12P3/00 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开一种枯草芽孢杆菌及应用其产纳米硒的方法。枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisSR41，于2021年10月11日保藏，保藏编号：CGMCC No.23536，具有高效还原亚硒酸钠并生成纳米硒的能力。枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SR41富硒发酵后可得到枯草芽孢杆菌及纳米硒的复合物，可进一步提取其中的纳米硒，即枯草芽孢杆菌产纳米硒。本发明首次公开了仅需超声破碎即可提取枯草芽孢杆菌产纳米硒的制备方法，所提取的纳米硒平均粒径为65.07±2.39nm，与现有的低速离心法或正己烷萃取并离心法等纳米硒提取方法相比，所得纳米硒粒径更低，且操作更为简单。同时，本发明公开了所述的枯草芽孢杆菌产纳米硒具有缓解细胞氧化应激的功能，提示其具有较好的抗氧化能力。

公开(公告)号：CN113583956B

公开(公告)日：2022-05-31

申请号：CN202110853165.3

申请日：2021-07-27

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  程远之 ,  肖肖 ,  宗鑫 ,  王凤芹 ,  路则庆 ,  靳明亮

IPC: C12N5/0786 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种细胞焦亡模型的构建方法及其应用。细胞焦亡模型的构建方法，包括以下步骤：1）病原菌活化；2）活化的病原菌处理细胞；3）细胞样品收集与构建效果检测；所述的病原菌为大肠杆菌K88，处理细胞所用的浓度为OD600=0.4~0.6，含活菌数为1~3×107CFU/mL，处理细胞2小时后加入终浓度为2 mM的三甲基腺苷ATP，处理时间共计2.5小时；所述的细胞为鼠源单核巨噬细胞J774A.1。应用到小鼠，包括1）大肠杆菌K88活化；2）活化菌液灌胃小鼠；3）小鼠样品收集与构建效果检测。本发明贴近实际生产，效果与LPS相当，且极大地降低了使用成本。本发明为后续探究细胞焦亡在机体抵御病原菌感染过程中发挥的作用及其机制提供了依据，并为治疗常见的病原菌感染奠定了基础。

公开(公告)号：CN114686395B

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202111405935.4

申请日：2021-11-24

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  程远之 ,  杜满 ,  颜溶 ,  曹进平 ,  王凤芹 ,  路则庆

IPC: C12N1/20 ,  C12P3/00 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开一种枯草芽孢杆菌及应用其产纳米硒的方法。枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisSR41，于2021年10月11日保藏，保藏编号：CGMCC No.23536，具有高效还原亚硒酸钠并生成纳米硒的能力。枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SR41富硒发酵后可得到枯草芽孢杆菌及纳米硒的复合物，可进一步提取其中的纳米硒，即枯草芽孢杆菌产纳米硒。本发明首次公开了仅需超声破碎即可提取枯草芽孢杆菌产纳米硒的制备方法，所提取的纳米硒平均粒径为65.07±2.39nm，与现有的低速离心法或正己烷萃取并离心法等纳米硒提取方法相比，所得纳米硒粒径更低，且操作更为简单。同时，本发明公开了所述的枯草芽孢杆菌产纳米硒具有缓解细胞氧化应激的功能，提示其具有较好的抗氧化能力。

公开(公告)号：CN115452974A

公开(公告)日：2022-12-09

申请号：CN202211005491.X

申请日：2022-08-22

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王凤芹 ,  汪以真 ,  路则庆 ,  程远之

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/34 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明公开了一种测定饲料中大观霉素的方法。试样中大观霉素用2%三氯乙酸水溶液（含0.4%乙二胺四乙酸二钠）提取，提取液经调节pH值至4.7±0.2，由混合型阳离子固相小柱净化，采用HILIC色谱柱分离，液相色谱质谱‑质谱联用法测定，基质匹配外标法定量。结果表明：本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法对饲料中大观霉素检出限为1.0 mg/kg，定量限为2.0 mg/kg。不同饲料基质中大观霉素浓度在0.1~10.0μg/mL范围内线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.99。大观霉素的回收率为91.3%~104.2%，相对标准偏差（RSD）为1.5%~9.4%。本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法灵敏、可靠，可应用于饲料中大观霉素的准确测定。

公开(公告)号：CN114814012A

公开(公告)日：2022-07-29

申请号：CN202210385369.3

申请日：2022-04-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王凤芹 ,  开丽霞 ,  汪以真 ,  路则庆 ,  程远之

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/34 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明公开一种饲料中林可胺类抗生素的测定方法。本发明采用80%甲醇磷酸氢二钾溶液对饲料中3种林可胺类抗生素（林可霉素、克林霉素和吡利霉素）进行提取，并采用混合型阳离子交换（MCX）固相萃取小柱对试样进行净化。通过液相色谱串联质谱法（LC‑MS/MS）对林可霉素、克林霉素和吡利霉素进行同时定量。结果表明，在40~4000μg kg‑1的添加水平下，7种饲料中林可胺类的平均回收率在81.5%~103.3%之间，日内和日间相对标准偏差小于10%。饲料中的检出限（LOD）和定量限（LOQ）在3.6~9.8μg kg‑1和11.4~31.3μg kg‑1之间。该方法适用于同时测定饲料中林可霉素、克林霉素和吡利霉素3种抗生素。本发明准确灵敏，操作简便，稳定性好。

公开(公告)号：CN112630316A

公开(公告)日：2021-04-09

申请号：CN202011308803.5

申请日：2020-11-19

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王凤芹 ,  曹进平 ,  汪以真 ,  路则庆 ,  程远之

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/34 ,  G01N30/36 ,  G01N30/72 ,  G01N30/86

Abstract: 本发明公开一种基于HPLC‑ICP‑MS分析富硒蛋白多糖硒形态的方法。富硒蛋白多糖中加入蛋白酶K和Tris‑HCl缓冲液，37℃恒温酶解18小时，并应用高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC‑ICP‑MS）分析酶解上清液中的硒化合物：亚硒酸钠（Na2SeO3）、硒代胱氨酸（SeCys2）、硒甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys）和硒代蛋氨酸（SeMet）。本发明方法酶解仅获得4种硒化合物，与标准品高度匹配，定量准确；回收率在78.35%~111.42%之间，该方法回收率高、条件温和、稳定性好。