公开(公告)号：CN101235084A

公开(公告)日：2008-08-06

申请号：CN200710067138.3

申请日：2007-01-31

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 林陈水 ,  付水星 ,  任慧颖 ,  黎小军 ,  徐伟 ,  于真真 ,  许明 ,  郑小玲 ,  钱俊青

IPC: C07K14/435 ,  C12N15/09 ,  C12N15/12 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明提供了一种制备重组骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽的方法：删除DsbA基因信号肽第2～18个氨基酸编码基因，保留第一个甲硫氨酸的密码子作为起始密码子，得到片段重组于表达载体中，获得的重组质粒1；将骨形态发生蛋白BMP－2完整成熟肽的DNA重组于重组质粒1中DsbA基因的下游，获得重组质粒2；将重组质粒2转化入表达宿主菌株的菌体中，得到工程菌经培养、添加诱导剂使目的基因表达，破菌、分离纯化得到DsbA－BMP－2融合蛋白，蛋白酶酶切DsbA－BMP－2融合蛋白，经分离得到所述的骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽。本发明方法制得的产物可与天然BMP－2成熟肽氨基酸序列完全一致，实现可溶性胞内融合表达，融合蛋白可以用Ni2+亲和层析一步纯化，进一步简化了BMP－2复性前的纯化步骤。