公开(公告)号：CN102634601A

公开(公告)日：2012-08-15

申请号：CN201210142444.X

申请日：2012-05-10

Applicant: 贵州大学

Inventor： 周碧君 ,  张双翔 ,  程振涛 ,  文明 ,  王开功

IPC: C12Q1/68 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种山羊传染性胸膜肺炎病原检测双重PCR诊断试剂盒的原料配方及制备、使用方法。原料配方为：1000~2000μLPCR反应液，100~200μLTaqDNA聚合酶，50~100μL阳性对照、50~100μL阴性对照、1mL-2mL超纯水。PCR反应液包括引物1混合液、引物2混合液、PCR反应缓冲液和dNTP，四种液体于PCR反应液中体积比为2:2:5:1。制备方法包括：最佳反应退火温度的确定；特异性检测；敏感性检测；临床应用性检测和试剂盒包装。本发明对山羊养殖场疑似山羊传染性胸膜肺炎病羊病原、疑似病例的快速、确定性诊断提供了有效方法，为山羊传染性胸膜肺炎防控提供技术支持。

公开(公告)号：CN113444743A

公开(公告)日：2021-09-28

申请号：CN202110693336.0

申请日：2021-06-22

Applicant: 贵州大学

Inventor： 程振涛 ,  杨鹏 ,  张双翔 ,  岳筠 ,  吴燕 ,  袁林

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N15/64 ,  C12N15/62 ,  A61K39/02 ,  A61K39/39 ,  A61P11/00 ,  A61P31/04 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了含佐剂基因的羊支原体肺炎二价核酸疫苗的构建方法，具体步骤如下：步骤一、Mo/Mmc基因组的提取：S1、Mo/Mmc贵州株的复苏与培养；S2、Mo/Mmc贵州株DNA的提取；步骤二、P113‑LppA‑IL‑2融合基因扩增：S1、粘膜免疫佐剂基因、绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种抗原基因扩增；S2、P113‑LppA融合基因扩增；S3、P113‑LppA‑IL‑2融合基因扩增；步骤三、含粘膜免疫佐剂基因的羊支原体肺炎二价核酸疫苗的制备。本发明通过选择两个不同抗原基因和黏膜免疫佐剂基因研制出核酸疫苗，可有效针对羊支原体肺炎DNA疫苗免疫效果弱等问题，解决目前疫苗研发所面临的诸多问题。

公开(公告)号：CN102634602A

公开(公告)日：2012-08-15

申请号：CN201210142472.1

申请日：2012-05-10

Applicant: 贵州大学

Inventor： 程振涛 ,  张双翔 ,  周碧君 ,  文明 ,  王开功

IPC: C12Q1/68 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒的原料配方及制备、使用方法。其原料配方为：1000~2000μL反应液，100~200μLBstDNA聚合酶，50~100μL阳性对照，50~100μL阴性对照，1mL-2mL液体石蜡，1mL-2mL超纯水；反应液包括内引物混合液、外引物混合液、LAMP反应缓冲液、Mg2+及dNTP，五种液体于反应液中体积比为2:2:2.5:2:1。制备方法包括以下内容：第一，最佳反应温度与时间的确定；第二，特异性检测、敏感性检测和临床应用性检测；第三，试剂盒包装。本发明对山羊养殖场绵羊肺炎支原体感染山羊疑似病例病原检测具有快速、简易、准确的特点。

公开(公告)号：CN113430214A

公开(公告)日：2021-09-24

申请号：CN202110694553.1

申请日：2021-06-22

Applicant: 贵州大学

Inventor： 张双翔 ,  杨鹏 ,  程振涛 ,  岳筠 ,  吴燕 ,  袁林

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了一种多病原羊支原体肺炎核酸疫苗的构建方法，包括以下步骤：步骤一：Mo/Mmc基因组的提取；步骤二：MoP113/MmcLppA基因获取；步骤三：pVAX1‑P113‑LppA共表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达。本发明在前期筛选出的羊肺炎支原体多表位抗原基因MoP113和MmcLppA基础上，通过基因工程方法构建出pVAX1‑P113‑LppA共表达载体，应用间接免疫荧光技术验证重组质粒在MDBK中的表达情况；本发明选择两个不同抗原基因研制出核酸疫苗，可有效针对Mo和Mmc感染引起的羊支原体肺炎提供免疫保护作用，解决目前疫苗研发所面临的诸多问题。

公开(公告)号：CN102634602B

公开(公告)日：2014-05-21

申请号：CN201210142472.1

申请日：2012-05-10

Applicant: 贵州大学

Inventor： 程振涛 ,  张双翔 ,  周碧君 ,  文明 ,  王开功

IPC: C12Q1/68 ,  C12R1/35

Abstract: 本发明公开了一种绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒的原料配方及制备、使用方法。其原料配方为：1000~2000μL反应液，100~200μLBstDNA聚合酶，50~100μL阳性对照，50~100μL阴性对照，1mL-2mL液体石蜡，1mL-2mL超纯水；反应液包括内引物混合液、外引物混合液、LAMP反应缓冲液、Mg2+及dNTP，五种液体于反应液中体积比为2:2:2.5:2:1。制备方法包括以下内容：第一，最佳反应温度与时间的确定；第二，特异性检测、敏感性检测和临床应用性检测；第三，试剂盒包装。本发明对山羊养殖场绵羊肺炎支原体感染山羊疑似病例病原检测具有快速、简易、准确的特点。