公开(公告)号：KR1020060106590A

公开(公告)日：2006-10-12

申请号：KR1020050084409

申请日：2005-09-10

Applicant: (주)엠젠

Inventor： 박광욱 ,  한귀승 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N15/06 ,  C12N5/16

Abstract: 본 발명은 HLA-G 유전자를 발현하는 형질전환 복제 돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 돼지 태아로부터 체세포를 분리하는 단계; 2) HLA-G 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조한 후 단계 1의 체세포에 도입시키는 단계; 3) 상기 발현벡터가 도입된 체세포를 선별한 후 배양하는 단계; 4) 모돈으로부터 채취한 난자의 핵을 제거하고 상기 체세포와 융합시키는 단계; 및 5) 상기 융합된 복제란을 대리모돈에 이식하고 자돈을 출산하는 단계를 포함하는 HLA-G 유전자를 발현하는 형질 전환 복제돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조 방법에 의한 HLA-G 유전자를 발현하는 형질 전환 복제돼지는 기존 방법의 후-번역 수정(post-translational modification) 또는 대량 생산등의 문제점을 극복할 수 있으며, 자연살해 세포(natural killer cell, NK cell)의 활성을 저해시켜 대상세포의 용해를 막아 이식 거부 반응을 억제함으로, 핵이식을 통한 HLA-G 유전자를 발현하는 돼지 생산 등 세포이용 치료 분야 및 이종 장기 이식 분야의 연구에 유용하게 사용할 수 있다.
HLA-G

公开(公告)号：KR1020060106319A

公开(公告)日：2006-10-12

申请号：KR1020050028951

申请日：2005-04-07

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  유지연 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N15/06 ,  C12N5/16

Abstract: 본 발명은 US2 단백질을 발현하는 형질전환 돼지 클론 체세포주 및 상기 세포주의 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 돼지 태아로부터 체세포를 분리하는 단계; 2) US2 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조한 후 단계 1의 체세포에 도입시키는 단계; 및 3) 상기 발현벡터가 도입된 체세포를 선별한 후 배양하는 단계를 포함하는 US2 단백질을 발현하는 형질전환 돼지 클론 체세포주의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조 방법에 의한 US2 단백질을 발현하는 돼지 클론 체세포주는 주요 조직적합성 복합체 제 1형 항원(major histocompatibility complex: MHC Class I)의 발현이 저해되어 세포성 면역거부반응이 최소화됨으로써, 핵이식을 통한 US2 단백질 발현 돼지의 생산에 이용하여 이종장기이식 연구 및 이의 산업적 이용성에 유용하게 사용할 수 있다.

公开(公告)号：KR100500412B1

公开(公告)日：2005-07-12

申请号：KR1020030014132

申请日：2003-03-06

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  박창식 ,  설재구 ,  허기남

IPC: C12N5/16

Abstract: 본 발명은 동물의 복제란 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 난자의 핵을 염색하지 않고 제 1 극체와 10 내지 20%의 세포질을 흡입(suction)하여 난자의 핵을 제거하는 단계; 제 1 극체와 핵을 제거한 상기 난자의 위란강에 체세포를 주입하여 난자-체세포 복합체를 제조하는 단계; 및 ⅲ) 0.5 내지 2 ㎸/㎝, 6 내지 150 ㎲로 1 내지 3회 시행하는 전기적 자극으로 상기 난자-체세포 복합체를 세포융합 및 활성화시키는 단계를 포함하는 동물의 복제란 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 복제란 제조방법은 고효율의 제핵률을 나타낼 뿐만 아니라 복제과정을 단순화시킴으로써 다양한 생물의 체세포를 복제하는데 유용하게 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR1020110093132A

公开(公告)日：2011-08-18

申请号：KR1020100012983

申请日：2010-02-11

Applicant: (주)엠젠

Inventor： 허재영 ,  최기명 ,  설재구 ,  홍승표 ,  박광욱 ,  유지연 ,  김수현 ,  박영철 ,  윤윤진

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

Abstract: PURPOSE: A transgenic porcine clonal somatic cell line which expresses human FasL gene in a tissue and cells is provided to reduce cytotoxicity and to minimize immune rejection. CONSTITUTION: A transgenic porcine clonal cell line contains human FasL gene expression vector and is deposited in the number KCLRF-BP-00194. A method for preparing the somatic cell line comprises: a step of isolating somatic cells from porcine fetus; a step of preparing hFasL gene expression vector and introducing to the somatic cells; and a step of selecting expression vector-introduced somatic cells and culturing.

Abstract translation: 目的：提供在组织和细胞中表达人FasL基因的转基因猪克隆体细胞系，以减少细胞毒性并使免疫排斥最小化。 构成：转基因猪克隆细胞系含有人FasL基因表达载体，并以KCLRF-BP-00194编号。 制备体细胞系的方法包括：从猪胎儿中分离体细胞的步骤; 制备hFasL基因表达载体并引入体细胞的步骤; 选择表达载体介导的体细胞和培养的步骤。

公开(公告)号：KR1020090068646A

公开(公告)日：2009-06-29

申请号：KR1020070136343

申请日：2007-12-24

Applicant: (주)엠젠

Inventor： 박광욱 ,  설재구 ,  최기명 ,  홍승표 ,  한귀승

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/06 ,  C12N15/09

Abstract: A method for producing transgenic pig which expresses HLA-G gene and DAF gene is provided to suppresses immune rejection of natural killer cell(NK cell) and use for cell theraphy and xeno-transplantation. A method for producing transgenic pig clone cell line which expresses human leukocyte antigen-G(HLA-G) gene and decay-accelerating factor(DAF) gene comprises: a step of isolating a somatic cell from HLA-G clonal pig; a step of inducing an expression vector containing DAF gene into the somatic cell; and a step of screening somatic cell in which the expression vector is induced. The expression vector is pCX-EGFP-BSD as a cloning vector. A method for producing the transgenic pig which expresses HLA-G gene and DAF gene comprises: a step of culturing the transgenic pig clone somatic cell line; a step of removing a nucleus of ovum and fusing clone somatic cell; and a step of transplanting the ovum to surrogate mother pig.

Abstract translation: 提供了表达HLA-G基因和DAF基因的转基因猪的制备方法，以抑制自然杀伤细胞（NK细胞）的免疫排斥，并用于细胞治疗和异种移植。 用于生产表达人白细胞抗原-G（HLA-G）基因和衰老加速因子（DAF））基因的转基因猪克隆细胞系的方法包括：从HLA-G克隆猪分离体细胞的步骤; 诱导含有DAF基因的表达载体进入体细胞的步骤; 以及筛选其中诱导表达载体的体细胞的步骤。 表达载体是作为克隆载体的pCX-EGFP-BSD。 一种生产表达HLA-G基因和DAF基因的转基因猪的方法包括：培养转基因猪克隆体细胞系的步骤; 去除卵的细胞核并融合克隆体细胞的步骤; 并将卵子移植到替代母猪的步骤。

公开(公告)号：KR3004868010000S

公开(公告)日：2008-04-10

申请号：KR3020070027701

申请日：2007-06-27

Applicant: (주)엠젠

Designer： 박광욱

公开(公告)号：KR1020070024069A

公开(公告)日：2007-03-02

申请号：KR1020050078585

申请日：2005-08-26

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  최기명 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N15/27 ,  C12N15/06

Abstract: A method for producing transgenic pig capable of expressing colony stimulating factor(CSF) gene in the mammary gland is provided to be able to easily obtain the transgenic pig, which is able to solve the problems of post-translational modification or mass-production and is used as a supplemental agent of treating leukemia and an immuno-potentiating agent, by expressing hGM-CSF in mammary gland. The method comprises the steps of: (a) isolating somatic cell from pig fetus on days 40-80 pregnancy; (b) after preparing an expression vector including a promoter specific to mammary gland such as alphas1-casein, beta-casein, beta-lactoglobulin and whey acidic protein; and a polynucleotide encoding the CSF such as hGM-CSF, introducing it into the somatic cell; (c) after selecting the expression vector-introduced clone somatic cell, culturing it; (d) removing nucleus of ovum collected from sow and fusing it with the clone somatic cell; and (e) transplanting the fused nuclear transfer embryos to surrogate mother pig and delivering piglets.

Abstract translation: 提供了能够在乳腺中表达集落刺激因子（CSF）基因的转基因猪的制备方法，以便能够容易地获得能够解决翻译后修饰或批量生产的问题的转基因猪，并且是 用作通过在乳腺中表达hGM-CSF来治疗白血病和免疫增强剂的补充剂。 该方法包括以下步骤：（a）在妊娠40-80天从胎儿分离体细胞; （b）在制备包括对乳腺特异性的启动子如α-α-酪蛋白，β-酪蛋白，β-乳球蛋白和乳清酸性蛋白质的表达载体后; 和编码CSF的多核苷酸，例如hGM-CSF，将其引入体细胞; （c）选择表达载体导入的克隆体细胞后进行培养; （d）去除从母猪收集的卵子的细胞核并与克隆体细胞融合; 和（e）将融合的核转移胚胎移植到替代母猪和递送仔猪。

公开(公告)号：KR101147409B1

公开(公告)日：2012-05-22

申请号：KR1020100012983

申请日：2010-02-11

Applicant: (주)엠젠

Inventor： 허재영 ,  최기명 ,  설재구 ,  홍승표 ,  박광욱 ,  유지연 ,  김수현 ,  박영철 ,  윤윤진

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

Abstract: PURPOSE: A transgenic porcine clonal somatic cell line which expresses human FasL gene in a tissue and cells is provided to reduce cytotoxicity and to minimize immune rejection. CONSTITUTION: A transgenic porcine clonal cell line contains human FasL gene expression vector and is deposited in the number KCLRF-BP-00194. A method for preparing the somatic cell line comprises: a step of isolating somatic cells from porcine fetus; a step of preparing hFasL gene expression vector and introducing to the somatic cells; and a step of selecting expression vector-introduced somatic cells and culturing.

公开(公告)号：KR1020080020251A

公开(公告)日：2008-03-05

申请号：KR1020060083489

申请日：2006-08-31

Applicant: (주)엠젠

Inventor： 박광욱 ,  설재구 ,  허기남 ,  김은정 ,  유지연

IPC: C12N5/07 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: A transgenic pig clonal somatic cell line expressing protectin CD59 gene is provided to minimize complement activation by inhibiting cytotoxicity destruction in xenotransplantation, so that the cell line is useful for inhibition of hyperacute rejection occurred by xenotransplantation. A transgenic pig clonal somatic cell line expressing protectin CD59 gene(KCLRF-BP-00139) contains an expression cassette pcDNA-CD59(neo) encoding CD59 gene having the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1. A method for manufacturing the transgenic pig clonal somatic cell line expressing protectin CD59 gene(KCLRF-BP-00139) comprises the steps of: (1) separating a somatic cell from the fetal pig by using primers of SEQ ID NOs:2 and 3; (2) preparing an expression vector containing a CD59 gene and transducing the expression vector into the somatic cell; and (3) selecting and culturing the transduced somatic cells. Further, the CD59 gene is SEQ ID NO:1.

Abstract translation: 提供表达保护素CD59基因的转基因猪克隆体细胞系以通过抑制异种移植中的细胞毒性破坏来最小化补体激活，使得细胞系可用于通过异种移植发生的超急性排斥的抑制。 表达保护素CD59基因（KCLRF-BP-00139）的转基因猪克隆体细胞系含有编码具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列的CD59基因的表达盒pcDNA-CD59（neo）。 用于制备表达保护素CD59基因（KCLRF-BP-00139）的转基因猪克隆体细胞系的方法包括以下步骤：（1）使用SEQ ID NO：2和3引物从胎猪分离体细胞; （2）制备含有CD59基因并将表达载体转导入体细胞的表达载体; （3）选择和培养转导的体细胞。 此外，CD59基因是SEQ ID NO：1。

公开(公告)号：KR100790514B1

公开(公告)日：2008-01-02

申请号：KR1020050078585

申请日：2005-08-26

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  최기명 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N15/27 ,  C12N15/06

Abstract: 본 발명은 인간 ＧＭ-ＣＳＦ를 유선에서 발현하는 형질전환 복제 돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 1) 돼지 태아로부터 체세포를 분리하는 단계; 2) 유선(mammary gland) 특이적 프로모터 및 CSF(Colony stimulating factor, 세포집락 자극 인자)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현벡터를 제조한 후 상기 체세포에 도입시키는 단계; 3) 상기 발현 벡터가 도입된 클론 체세포를 선별한 후 배양하는 단계; 4) 모돈으로부터 채취한 난자의 핵을 제거하고 상기 체세포와 융합시키는 단계; 및 5) 상기 융합된 복제란을 대리모돈에 이식하고 자돈을 출산하는 단계를 포함하는 CSF 단백질을 발현하는 형질전환 돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 형질전환 돼지는 기존 방법의 후-번역 수정(post-translational modification) 또는 대량 생산등의 문제점을 극복할 수 있으며, hGM-CSF를 유선에서 발현함으로써 쉽게 획득할 수 있는 잇점과 함께 이를 백혈병 치료 보조제 및 면역 강화제 등으로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.