Abstract:
PURPOSE: Provided are a vector including human epidermal growth factor(EGF) which promotes the growth of human epidermal cells and inhibits the secretion of gastric acid and a manufacturing method of EGF by using the vector. CONSTITUTION: The vector including EGF is manufactured by the steps of: inserting T-mox(MOX terminator) into a recognition site of pUC19 vector to prepare pUC-Tmox vector; inserting LEU2 gene into a recognition site of pUC-Tmox to prepare pUC-TaLE vector; inserting P-mox gene(MOX promotor), alpha pre-proleader(ppL) sequence and EGF gene into a recognition site of SalI of pUC-TaLE vector; cutting pU-EGF2 vector with EcoRI restriction enzyme; and inserting a fragment including P-mox/ppL/hEGF/T-mox into a recognition site of EcoRI of aP3 vector.
Abstract:
본 발명은 효모 한세눌라 폴리모르파 DL-1 유래의 MOX 프로모터와 알부민 자체의 분비 시그날을 포함하는 알부민 cDNA를 이용하여 발현벡터를 조립하고, 이를 효모 한세눌라 폴리모르파에 도입하여 조립된 발현벡터가 염색체에 삽입(integration)된 형질 전환 효모를 선별, 발효 배양시켜 인간 혈청 알부민을 고효율로 발현시킴을 특징으로 하는 인간 혈청 알부민의 제조 방법, 발현 벡터 및 형질전환 효모에 관한 것이다.
Abstract:
PURPOSE: Human serum albumin is over expressed in Hansenula polymorpha DL-1 transformed with HSA gene under the control of methanol oxidase gene promoter. CONSTITUTION: The invention is disclosed transformed yeasts Hansenula polymorpha DL-1 which has integrated HSA gene, isolated from human fetal liver cDNA library and removed 5'UTR without signal sequence, controlled by methanol oxidase gene promoter. Transformed yeast is cultured in YPM medium( 1 % of yeast extract, 2 % of Bacto peptone, and 2 % of methanol) at 37°C for 72 hrs. Methanol is supplied at every 12 hrs to keep the concentration 2 % of methanol in the medium constant after 24 hrs. The concentration of expressed HSA is 40-50 mg/l by western blotting compared with authentic standard HSA. This method also detects smaller degraded HSA proteins in the medium.
Abstract:
본 발명은 글루코노박터 서브옥시단스(KCTC 2111) 균주의 원형질막에 존재하는 솔비톨 탈수소효소(sorbitol dehydrogenase) 및 이를 코드하는 유전자에 관한 것이다. 글루코노박터 서브옥시단스로부터 분리, 정제된 솔비톨 탈수소효소는 3 개의 서브유니트로 구성되어 있으며, 피롤로퀴놀린 퀴논(PQQ)을 조효소로 포함하는 75 kDa 분자량의 탈수소효소 서브유니트인 제 1 서브유니트, 50 kDa 분자량의 시토크롬 c인 제 2 서브유니트, 그리고 솔비톨 탈수소효소의 안정성에 중요한 역할을 하는 29 kDa 분자량의 제 3 서브유니트로 구성되어 있는 막결합형 솔비톨 탈수소효소이다. 그리고 솔비톨 탈수소효소의 유전자는 2265 bp를 갖는 제 1 서브유니트와 1437 bp를 갖는 제 2 서브유니트를 포함하며, 이들 서브유니트는 제한효소 PstI으로 절단되는 5.7 kb 크기의 DNA 절편내에 연결되어 있다.
Abstract:
본 발명은 두가지 균주를 이용한 2단계 반응 시스템에 의해 L-솔보스를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 막투과 처리후 고정화시킨 자이모모나스 모빌리스(Zymomonas mobilis) 균주에 의해 포도당 및 과당으로부터 솔비톨을 제조하는 단계; 및 막투과 처리후 고정화시킨 글루코노박터 서브옥시단스(Gluconobacter suboxydans) 균주에 의해 상기에서 제조된 솔비톨을 L-솔보스로 전환시키는 단계를 포함하는, 2단계 반응시스템에 의하면, 보다 안정되고 효율적으로 L-솔보스를 제조할 수 있다.
Abstract:
The hirudin expression vector pYEGa-HIR5 (KCTC 8518P) containing hirudin gene (I) consists of linked promoter GAL1-GAL10, alpha factor of yeasts (a on plasmid means alpha), peptide sequence for leu-asp-lys-arg which is hydrolyzed by KEX2 as operator endopeptidase and hirudin gene. The other plasmid pYEGa-HIR525 (KCTC 8519BP) (II) consists of GAL10 as promoter rather than GAL1-GAL10 of (I). (I) and (II) are useful for yeast expression to solve the problems which in E. coli the expressed hirudin is hydrolysed and the N-terminal methionine modified hirudin does not have the activity.
Abstract:
본 발명은 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha)의 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소(GAPDH) 유전자, GAPDH 프로모터 및 이 프로모터를 함유하는 발현 벡터에 관한 것으로, 본 발명에 따른 GAPDH 프로모터는 강력한 구성적 발현 프로모터로서 탄소원에 따른 별도의 발현 유도가 필요하지 않으므로 한세눌라 폴리모르파에서 외래 단백질을 발현시키는데 매우 유용한다.
Abstract:
본 발명은 효모로부터 인체 부갑상선 호르몬(human parathyroid hormone: hPTH)을 효율적으로 생산하는 방법에 관한 것으로 단백질 분해 효소인 효모 아스파틱 프로테아제 3 (Yeast Aspartic Protease 3: YAP3) 결손 균주를 제작하여 인체 부갑상선 호르몬의 분해를 최소화하므로써 완전한 형태의 인체 부갑상선 호르몬을 생산하는 방법을 제공한다.