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公开(公告)号：CN104357417B
公开(公告)日：2018-02-06
申请号：CN201410606913.8
申请日：2014-10-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种强化毕赤酵母高密度发酵产葡萄糖氧化酶的方法，属于发酵技术领域。本发明采用甘露醇混合流加、两步式甲醇流加等策略高密度发酵不同葡萄糖氧化酶毕赤酵母工程菌株，建立了一种能够有效提高葡萄糖氧化酶生产的方法。使用该策略，重组菌株PP‑G‑GCN4在甘露醇与甲醇混合比例为1：20、两阶段甲醇控制量1.8‑1.2％时，在3L发酵罐上酶活1634.7U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN104357417A
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201410606913.8
申请日：2014-10-30
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12Y101/03004
Abstract: 本发明公开了一种强化毕赤酵母高密度发酵产葡萄糖氧化酶的方法，属于发酵技术领域。本发明采用甘露醇混合流加、两步式甲醇流加等策略高密度发酵不同葡萄糖氧化酶毕赤酵母工程菌株，建立了一种能够有效提高葡萄糖氧化酶生产的方法。使用该策略，重组菌株PP-G-GCN4在甘露醇与甲醇混合比例为1：20、两阶段甲醇控制量1.8-1.2％时，在3L发酵罐上酶活1634.7U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102936585B
公开(公告)日：2014-11-26
申请号：CN201210528312.0
申请日：2012-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种发酵生产葡萄糖氧化酶酶活的方法，属于发酵工程领域。本发明采用本实验室在前期工作中构建的可以产较高活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastorisGS115-pPIC9K-GOX基因工程菌，保藏编号为CCTCC NO：M 2012266。在甲醇诱导阶段通过添加山梨醇来提高葡萄糖氧化酶的酶活:即控制发酵液中甲醇残留浓度1.8%(W/V)，且甲醇与山梨醇混合添加比例为10:1(W/W)时，葡萄糖氧化酶的酶活为645.3U/mL，比不添加山梨醇(427.6U/mL)提高了50.9%，而且有效缩短了发酵周期，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102965292A
公开(公告)日：2013-03-13
申请号：CN201210527908.9
申请日：2012-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种过量表达Haclp基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母的Haclp基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOX保藏编号为CCTCC NO：M2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在摇瓶中的酶活为66.24U/mL，比使用该方法前的酶活55.31U/mL有明显提高，此外本方法能显著提高生产效率，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102936585A
公开(公告)日：2013-02-20
申请号：CN201210528312.0
申请日：2012-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种发酵生产葡萄糖氧化酶酶活的方法，属于发酵工程领域。本发明采用本实验室在前期工作中构建的可以产较高活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastorisGS115-pPIC9K-GOX基因工程菌，保藏编号为CCTCC NO：M 2012266。在甲醇诱导阶段通过添加山梨醇来提高葡萄糖氧化酶的酶活:即控制发酵液中甲醇残留浓度1.8%(W/V)，且甲醇与山梨醇混合添加比例为10:1(W/W)时，葡萄糖氧化酶的酶活为645.3U/mL，比不添加山梨醇(427.6U/mL)提高了50.9%，而且有效缩短了发酵周期，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102382773B
公开(公告)日：2013-01-30
申请号：CN201110329425.3
申请日：2011-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产葡萄糖氧化酶的黑曲霉及其应用，属于微生物技术领域。本发明筛选得到一株黑曲霉，发酵96小时葡萄糖氧化酶活可达2.2U mL-1，于2011年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2011291，分类学命名：黑曲霉BBE11721(Aspergillus niger BBE11721)。本发明提供的黑曲霉具有葡萄糖氧化酶产量高的优点，经优化摇瓶产量可达4.6U mL-1；该菌株分泌的葡萄糖氧化酶可耐受较高温度，粗酶液40℃、45℃条件下，60分钟酶活没有损失，60℃条件下30分钟降到降到原有酶活的65％，60分钟降到50％。
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公开(公告)号：CN102994541B
公开(公告)日：2015-04-15
申请号：CN201210552718.2
申请日：2012-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母UPR关键基因Haclp与下游靶基因Pdi1、Ero1、Lhs1、Kar2、Sil1分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα与pPIC3.5K，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOD保藏编号为CCTCC NO：M 2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活585U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102994541A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210552718.2
申请日：2012-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母UPR关键基因Haclp与下游靶基因Pdi1、Ero1、Lhs1、Kar2、Sil1分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα与pPIC3.5K，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOD保藏编号为CCTCC NO：M 2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活585U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102382773A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110329425.3
申请日：2011-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产葡萄糖氧化酶的黑曲霉及其应用，属于微生物技术领域。本发明筛选得到一株黑曲霉，发酵96小时葡萄糖氧化酶活可达2.2UmL-1，于2011年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2011291，分类学命名：黑曲霉BBE11721(Aspergillus niger BBE11721)。本发明提供的黑曲霉具有葡萄糖氧化酶产量高的优点，经优化摇瓶产量可达4.6UmL-1；该菌株分泌的葡萄糖氧化酶可耐受较高温度，粗酶液40℃、45℃条件下，60分钟酶活没有损失，60℃条件下30分钟降到降到原有酶活的65％，60分钟降到50％。
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