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公开(公告)号：CN105602997A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201610000452.9
申请日：2016-01-04
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了Enterobacter cloacae制备生物纳米单质硒的方法及应用。一种Enterobacter cloacae制备生物纳米单质硒的方法，以亚硒酸盐为原料，以Enterobacter cloacae Z0206为发酵菌，发酵生产生物纳米单质硒；包括以下步骤：（1）活化的Enterobacter cloacae 接种于发酵培养基中，加入亚硒酸钠溶液；（2）振荡培养；（3）收集发酵液处理得到生物纳米单质硒或者生物纳米单质硒-多糖复合物。本发明对于制备的各种参数和条件等做了优化，克服了产品潜在的缺陷和生产的不确定性，易于大规模的应用和生产。本发明制备的生物纳米单质硒或者复合物添加至猪饲料中替代亚硒酸钠，达到促进生长，改善抗氧化功能和免疫功能的效果。
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公开(公告)号：CN119320777A
公开(公告)日：2025-01-17
申请号：CN202411425490.X
申请日：2024-10-12
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种促进猪肠道防御素pBD1表达的代谢产物筛选方法及其应用。筛选方法包括以下步骤：1）构建猪防御素pBD1基因荧光报告肠上皮细胞系：2）基于pBD1基因荧光报告肠上皮细胞系评估不同代谢产物的促进作用：3）基于猪肠上皮细胞IPEC‑J2模型进一步评估步骤2）筛选得到的代谢产物的促进作用：4）基于猪肠道类器官再进一步评估步骤3）筛选得到的代谢产物的促进作用。本发明可用于制备或者筛选影响猪肠道防御素pBD1表达的药物。本发明首次发现了D‑苹果酸通过促进防御素pBD1表达从而改善猪肠道免疫功能的作用，并在猪肠道类器官模型上进行了验证，同时优化了D‑苹果酸促进猪肠道防御素pBD1表达的最佳处理浓度。
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公开(公告)号：CN111855847B
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202010653368.3
申请日：2020-07-08
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种高效液相色谱法测定富硒蛋白多糖中总硒含量的方法。该方法以2,3—二氨基萘为螯合剂，以400µL乙腈为分散剂，120µL氯苯为萃取剂，硒（IV）与2,3—二氨基萘的螯合物（4,5‑苯并苤硒脑）经乙腈稀释后直接采用PFP色谱柱分离，乙腈洗脱，用荧光检测器在激发波长为376 nm、发射波长为520 nm条件下测定荧光强度，外标法定量。本方法具有实验结果稳定、样品转移少、试剂用量少、回收率高等特点。
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公开(公告)号：CN112630316B
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202011308803.5
申请日：2020-11-19
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开一种基于HPLC‑ICP‑MS分析富硒蛋白多糖硒形态的方法。富硒蛋白多糖中加入蛋白酶K和Tris‑HCl缓冲液，37℃恒温酶解18小时，并应用高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC‑ICP‑MS）分析酶解上清液中的硒化合物：亚硒酸钠（Na2SeO3）、硒代胱氨酸（SeCys2）、硒甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys）和硒代蛋氨酸（SeMet）。本发明方法酶解仅获得4种硒化合物，与标准品高度匹配，定量准确；回收率在78.35%~111.42%之间，该方法回收率高、条件温和、稳定性好。
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公开(公告)号：CN113621648A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202111002489.2
申请日：2021-08-30
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种pBD1基因荧光报告肠上皮细胞系的构建方法及其应用。仔猪小肠样品分离得到基因组DNA，并利用PCR技术扩增pBD1启动子片段，序列如SEQ ID NO.1所示，将pBD1启动子片段克隆到pGL4.21荧光报告载体中得到pBD1荧光报告质粒，进行酶切线性化后转染猪肠上皮细胞，从而筛选获得阳性细胞系。本发明提供的筛选细胞系的应用，一次可最多检测数十种营养物质对pBD1基因的调控作用，本发明所公开的方法创新性地利用酶切线性化质粒载体转染细胞，构建了一种可长期稳定表达pBD1基因的筛选细胞系，极大地提高了营养物质的筛选效率，可克服现有方法中细胞因生长状态、不同检测方法等因素造成的干扰，有利于开发具有pBD1基因调控功能的营养物质及其后续应用生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113583956A
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202110853165.3
申请日：2021-07-27
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N5/0786 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种细胞焦亡模型的构建方法及其应用。细胞焦亡模型的构建方法，包括以下步骤：1）病原菌活化；2）活化的病原菌处理细胞；3）细胞样品收集与构建效果检测；所述的病原菌为大肠杆菌K88，处理细胞所用的浓度为OD600=0.4~0.6，含活菌数为1~3×107CFU/mL，处理细胞2小时后加入终浓度为2 mM的三甲基腺苷ATP，处理时间共计2.5小时；所述的细胞为鼠源单核巨噬细胞J774A.1。应用到小鼠，包括1）大肠杆菌K88活化；2）活化菌液灌胃小鼠；3）小鼠样品收集与构建效果检测。本发明贴近实际生产，效果与LPS相当，且极大地降低了使用成本。本发明为后续探究细胞焦亡在机体抵御病原菌感染过程中发挥的作用及其机制提供了依据，并为治疗常见的病原菌感染奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113009045A
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN202110331692.8
申请日：2021-03-29
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开一种饲料中斑蝥黄的测定方法。试样中斑蝥黄经水分散、乙醇和二氯甲烷提取，配合饲料和浓缩饲料的提取液用HLB小柱净化，添加剂预混合饲料的提取液则直接稀释。试样经反相高效液相色谱仪分离，外标法定量试样中全反式斑蝥黄和顺式斑蝥黄的总量。该方法能够满足饲料中斑蝥黄顺反异构体的快速、准确测定需要。
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公开(公告)号：CN107435030B
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201710517574.X
申请日：2017-06-29
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种副地衣芽孢杆菌以及制备富生物纳米硒益生菌的方法。副地衣芽孢杆菌，命名为Bacillus paralicheniformis ZJUSE‑1，于2017年3月21日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：CGMCC No.13908，发酵后得到富生物纳米硒益生菌。生物纳米硒被含多糖及蛋白特征基团的分泌物包被，具有抗氧化活性，能够清除DPPH自由基、超氧阴离子。生物纳米硒与益生菌发挥协同作用，能够有效修复机体氧化损伤，缓解幼仔因断奶导致的氧化应激，提高养殖生产的经济效益。
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公开(公告)号：CN119320786A
公开(公告)日：2025-01-17
申请号：CN202411387348.0
申请日：2024-10-01
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N15/70 , C07K14/435 , C12N15/12 , A23L33/135 , A61K38/17 , A61K35/74 , A61P1/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种表面展示抗菌免疫肽Scy的重组工程菌构建方法与应用。本发明以益生菌大肠杆菌Nissle1917(EcN)为宿主菌株，pnirBmisL(pnir)为质粒载体，成功实现了异源来源——蟹精液中的抗菌免疫肽Scy在宿主菌表面的高效展示。该方法避免了抗菌肽的复杂纯化步骤，使抗菌肽Scy能够直接通过工程菌EcN‑Scy应用。工程菌在模拟胃肠道强酸高盐的条件下依然展现较高的生存活性；同时，对葡聚糖硫酸钠(DSS)引起的小鼠肠道黏膜屏障损伤具有保护作用，可以显著缓解DSS诱导的小鼠体重降低、结肠长度变短等症状，改善结肠形态，缓解肝损伤，通过调节肠道免疫细胞因子、增强抗氧化能力、维护肠道物理屏障等多种途径，全面保护肠道健康，为炎症性肠病的治疗提供了新的生物制剂候选。
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公开(公告)号：CN118185828A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410436679.2
申请日：2024-04-11
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N1/20 , C12N1/16 , C02F11/02 , C12R1/05 , C12R1/07 , C12R1/01 , C12R1/645 , C02F101/16 , C02F101/10 , C02F101/34 , C02F101/38
Abstract: 本发明公开了一种水泡粪除臭菌的筛选方法及复合微生物除臭剂。建立一种猪舍水泡粪模型用于筛选除臭微生物，通过对水泡粪中氨气和硫化氢降解进行初筛以及对粪臭素、苯酚、含硫恶臭物、胺类降解进行复筛，获得4株综合除臭能力强的微生物。将筛选获得的4株菌按照体积比1:1:1:1制备复合微生物除臭剂，制备得到的复合微生物除臭剂可有效降低水泡粪氨气、硫化氢、粪臭素、苯酚、4‑乙基苯酚、苯甲酸、甲硫醇、乙硫醇类、甲硫醚、腐胺和乙酸等多种猪舍恶臭物质。制备得到的复合微生物除臭剂可以降低水泡粪细菌丰度和多样性，抑制杂菌生长，提高水泡粪中与大多数降解恶臭物质降解相关微生物，降低与大多数代谢产生恶臭物质相关微生物。
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