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公开(公告)号:CN113088504A
公开(公告)日:2021-07-09
申请号:CN202110388771.2
申请日:2021-04-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造的酸性磷酸酶及其应用,属于生物工程技术领域。本发明提供了一种改造的酸性磷酸酶PaAPasemu3,通过在大肠杆菌中表达所述改造的酸性磷酸酶PaAPasemu3,利用全细胞转化法,将维生素C转化为维生素C磷酸酯。并从反应的pH、温度方面对改造的酸性磷酸酶PaAPasemu3的催化体系进行优化,可使得维生素C磷酸酯产量达到90.1 g/L,摩尔产率达75.1%。从而大大降低了之前的底物成本和环境污染等问题,为维生素C磷酸酯的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号:CN112746061A
公开(公告)日:2021-05-04
申请号:CN202110203953.8
申请日:2021-02-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用,属于生物工程技术领域。本发明的改造方法通过组合突变设计出最佳突变体,对PvDAPDH的蛋白质进行改造,克服了之前野生型的酶因为活性低而导致的转化率低的局限,最终得到最佳突变体L7(PvDAPDHW121A/H227I/R180S),其酶活为野生型的85倍;将该突变体L7进一步与L‑氨基酸脱氨酶(PmLAAD)和葡萄糖脱氢酶(BmGDH)级联,以L‑苯丙氨酸为底物,D‑苯丙氨酸产量达到48.5g/L,因此大大降低了之前的高菌体量以及昂贵的底物成本,为D‑苯丙氨酸的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号:CN112626100A
公开(公告)日:2021-04-09
申请号:CN202011588760.0
申请日:2020-12-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高通量筛选α‑酮酸高产菌株方法,属于生物工程技术领域。本发明对来源于奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD进行蛋白质工程改造,并使用高通量筛选的方法,在96孔板中培养含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组菌株及菌株突变体,并进行转接诱导,离心收集含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的细胞来转化L‑氨基酸(L‑缬氨酸、L‑甲硫氨酸及L‑苯丙氨酸)生成其对应的α‑酮酸,并利用2,4‑二硝基苯肼显色后于520nm处读取吸光值,并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证,筛选得到α‑酮酸产量显著提高的菌株。
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公开(公告)号:CN112410385A
公开(公告)日:2021-02-26
申请号:CN202011329678.6
申请日:2020-11-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450环氧酶及其应用,属于生物工程技术领域。本发明提供了一种细胞色素P450环氧酶CytP,通过在大肠杆菌中表达所述环氧酶CytP,利用全细胞转化法,将降冰片烯转化为环氧降冰片烷。并从反应的pH、温度、相比和诱导时间等因素对CytP酶的两相催化体系进行优化,克服了之前P450单加氧酶环氧化活性低且催化特异性差的局限,可使得环氧降冰片烷产量达到36.81g/L,催化特性达到99%,环氧化反应摩尔产率达31.46%。从而大大降低了之前的底物成本和环境污染等问题,为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号:CN110923261A
公开(公告)日:2020-03-27
申请号:CN201911322346.2
申请日:2019-12-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种增强酿酒酵母抗高渗胁迫能力的方法,属于生物工程技术领域。利用质粒pY13过表达基因ELO2,构建过表达菌株BY4741/pY13-ELO2,使得菌株抗高渗胁迫能力增强,具体表现为胁迫条件下,过表达菌株生物量提高29%,存活率提高22.1%;正常条件下,细胞膜上C20:0,C22:0和C24:0的脂肪酸含量分别提高了52.3%、94.1%和14.4%。上述结果表明过表达基因ELO2可以提高酵母菌株在高渗胁迫条件下的生存能力。
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公开(公告)号:CN110643585A
公开(公告)日:2020-01-03
申请号:CN201911088054.7
申请日:2019-11-08
Applicant: 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
Abstract: 本发明公开了一种利用氨基酸脱氨酶生产α-酮-β-甲基正戊酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明是在氨基酸脱氨酶突变体Pm-LAAD*的基础上,利用构象动力学的方法进行蛋白质工程改造,获得新的突变体Pm-LAAD*(V411A/T414A),其稳定性显著提高,50℃下半衰期从8h增加至10h,4℃冷藏保存的半衰期从150h上升至240h。该酶经过改造后,转化体系中不添加任何缓冲剂,转化通气量仅为0.2vvm,转化体系中添加湿细胞添加量15g/L,转化12h,L-异亮氨酸摩尔转化率达到95%以上,产量达到98.0g/L,下游纯化简易,极大地降低了生产成本,能够满足工业化需求。
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公开(公告)号:CN104805144A
公开(公告)日:2015-07-29
申请号:CN201510230669.4
申请日:2015-05-07
Applicant: 江南大学 , 无锡宸明生物技术有限公司
Abstract: 本发明公开了一种高效生产L-瓜氨酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段从乳酸菌中克隆获得精氨酸脱亚胺酶基因,采用分子生物学和过程优化等手段,提高ADI生产菌株产酶能力,通过优化催化体系,建立高效生物催化生产L-瓜氨酸的平台。发酵得到的菌体无需破碎,即可直接用于转化,在50℃条件下,工程菌具有较高的透性,更有利于底物的吸收和产物的释放,反应速度得到极大的提高,转化周期仅需4-12h,瓜氨酸产量可达150-180g/L,转化率94%以上。
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公开(公告)号:CN119799687A
公开(公告)日:2025-04-11
申请号:CN202411808573.7
申请日:2024-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种用于对羟基苯甘氨酸外消旋化的消旋酶突变体及其应用,属于生物工程技术领域。本发明以L‑对羟基苯甘氨酸和PLP为原料,利用活性被提高的消旋酶(LbAAR)突变体进行L‑对羟基苯甘氨酸的外消旋化,整体催化过程绿色简单高效。其中,野生型对底物L‑HPG未检测到活性,通过突变L307S获得了对底物L‑HPG的活性,此外,最优突变体的酶活可达到115.2μmol/min/g,相较M1提高了16.5倍,极大提高了此酶的活性。本发明为快速对羟基苯甘氨酸的外消旋化提供了新思路。
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公开(公告)号:CN119506233A
公开(公告)日:2025-02-25
申请号:CN202411642110.8
申请日:2024-11-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用于合成β‑羟基异戊酸的4‑羟基苯丙酮酸双加氧酶突变体及应用,属于生物工程技术领域。本发明构建了4‑羟基苯丙酮酸双加氧酶突变体,能够显著提高4‑羟基苯丙酮酸双加氧酶的催化效率。本发明还将构建的4‑羟基苯丙酮酸双加氧酶和L‑氨基酸脱氨酶共同用于催化制备β‑羟基异戊酸,可使HMB的产量达7g/L,转化率为77%。相较于目前能够催化L‑亮氨酸生成HMB的4‑羟基苯丙酮酸双加氧酶,本发明的HMB的产量更高。其中,BbHPPD A366P/M359V/N382S的HMB产量是野生酶的3.7倍,加快了酶转化法生产HMB的工业化进程。
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公开(公告)号:CN118638842A
公开(公告)日:2024-09-13
申请号:CN202410734672.9
申请日:2024-06-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于转录因子工程提高酵母高渗胁迫耐受能力的方法,属于生物工程技术领域。本发明提供的过表达stb5基因的酿酒酵母工程菌能够在不影响菌株正常生长的情况下提高对高渗胁迫的耐受能力,能够耐受1.2M NaCl,在该浓度下的生物量较野生型菌株显著增加18%且胞内NADPH含量提升18%。本发明构建的酿酒酵母工程菌在高渗胁迫下生长速率较野生型菌株显著增加24%,对高渗胁迫所造成氧化损伤的防御能力显著提高,有利于提高酵母发酵产品的产量。
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