公开(公告)号：CN104357417B

公开(公告)日：2018-02-06

申请号：CN201410606913.8

申请日：2014-10-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 张娟 ,  陈坚 ,  顾磊 ,  堵国成 ,  沈伊娜

IPC: C12N9/04 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种强化毕赤酵母高密度发酵产葡萄糖氧化酶的方法，属于发酵技术领域。本发明采用甘露醇混合流加、两步式甲醇流加等策略高密度发酵不同葡萄糖氧化酶毕赤酵母工程菌株，建立了一种能够有效提高葡萄糖氧化酶生产的方法。使用该策略，重组菌株PP‑G‑GCN4在甘露醇与甲醇混合比例为1：20、两阶段甲醇控制量1.8‑1.2％时，在3L发酵罐上酶活1634.7U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。

公开(公告)号：CN104357343A

公开(公告)日：2015-02-18

申请号：CN201410653076.4

申请日：2014-11-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈坚 ,  刘晓筱 ,  张娟 ,  堵国成 ,  顾磊

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N9/04 ,  C12R1/645

CPC classification number: C12R1/645 ,  C12N9/0006 ,  C12Y101/03004

Abstract: 本发明公开了一种重组表达葡萄糖氧化酶的解脂耶氏酵母及其应用，属于生物技术领域。本发明通过构建重组质粒pINA1297-GOD，醋酸锂转化法转化解脂耶氏酵母po1h，筛选获得了具有较好产酶能力的重组菌株。该菌株在以蔗糖为唯一碳源，发酵168h后，葡萄糖氧化酶酶活力达到13.9U/ml，与原黑曲霉相比，提高了两倍。

公开(公告)号：CN103614350A

公开(公告)日：2014-03-05

申请号：CN201310699636.5

申请日：2013-12-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈坚 ,  闻一凡 ,  张娟 ,  堵国成 ,  顾磊 ,  刘晓筱

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/84

CPC classification number: C12N9/0006 ,  C12Y101/03004

Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的葡萄糖氧化酶，属于酶工程技术领域。本发明采用基因重组技术将葡萄糖氧化酶524位点的甲硫氨酸突变为亮氨酸，并转化入毕赤酵母Pichia pastoris GS115中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株催化效率提高的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在50mL摇瓶上酶活64.6U/mL，比野生型提高了近10%。催化效率Kcat/Km为76.98mM-1·s-1，比野生型（16.73mM-1·s-1）提高了近4.5倍。

公开(公告)号：CN102925375A

公开(公告)日：2013-02-13

申请号：CN201210350000.5

申请日：2012-09-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈坚 ,  顾磊 ,  张娟 ,  堵国成 ,  沈依娜 ,  李梦洁 ,  李婷 ,  王丹 ,  丁雪 ,  殷政

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N9/04 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种产葡萄糖氧化酶酵母工程菌及构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明采用重组DNA技术将黑曲霉的葡萄糖氧化酶（GOD）基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pGAPZα，并转化Pichia pastoris X33，经筛选鉴定得到一株可以产较高活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastoris X33-pGAPZα-GOD，保藏编号为CCTCC NO：M2012267。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在摇瓶中的酶活为23U/mL，比野生菌的酶活提高了近11倍，为葡萄糖氧化酶的大规模生产及作为食品添加剂在淀粉中的应用奠定了良好的基础。