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公开(公告)号：CN108795919B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN201810549433.0
申请日：2018-05-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种催化制备UDP‑鼠李糖的融合酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明获得了一种能实现辅酶自循环而催化UDP‑葡萄糖生成UDP‑鼠李糖的融合酶VvRHM‑NRS，在反应体系中只需在起始阶段添加少量的NAD+，无需加入NADPH，就可生成UDP‑鼠李糖，这是首次能实现辅酶自循环而合成UDP‑鼠李糖。
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公开(公告)号：CN107641621B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN201710448315.6
申请日：2017-06-14
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及酶工程及生物医药技术领域，尤其涉及一种糖苷酶组合物及酶法制备淫羊藿苷元的方法。本发明筛选获得了一种能有效降解淫羊藿苷母核结构上鼠李糖残基的α‑L‑鼠李糖苷酶及能高效降解其母核结构中葡萄糖残基耐高温β‑葡萄糖苷酶，随后通过双酶转化高效制备具有完全保持原有生物活性的淫羊藿苷元。本发明提供的组合物中，两种糖苷酶的最适反应温度都较高，底物溶解性较好，不需要助溶剂；并且酶解时间短，得率高。实验表明，采用本发明提供的糖苷酶组合物对淫羊藿苷进行酶解，摩尔转化率为98.3％，淫羊藿苷元的得率为90％。
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公开(公告)号：CN107384896B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201710685211.7
申请日：2017-08-11
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种制备稀有人参皂苷的酶组合物及其应用，应用于转化多组分人参皂苷制备人参皂苷C‑K等稀有人参皂苷。其特征在于一种嗜热菌来源能够一次性切除人参皂苷母核3位上两个糖基的β‑葡萄糖苷酶，获得稀有组分C‑Y、C‑Mc和C‑Mx，其摩尔转化率均高于96%。再一步，通过3种特异性的糖苷水解酶再分别切除前述三种产物各自20位外侧的阿拉伯吡喃糖、阿拉伯呋喃糖和木糖，获得最终产物稀有人参皂苷C‑K，摩尔转化率也均高于98%。本发明提供了一种新的稀有人参皂苷制备路线，并且能够同时高效转化多组分人参皂苷Rb2、Rc和Rb3获得稀有人参皂苷C‑K。
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公开(公告)号：CN105238826B
公开(公告)日：2019-02-05
申请号：CN201510812991.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
IPC: C12P17/06
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别涉及β‑葡萄糖苷酶的用途及用其制备黄芩素的方法。所述β‑葡萄糖苷酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了酶水解黄芩苷的方法，将一种耐热耐糖β‑葡萄糖苷酶固定化后在缓冲溶液中将黄芩苷水解，获得黄芩素。该酶具有很强的产物耐受性，无需在双相体系中就能将黄芩苷水解完全，避免了双相体系中的有机溶剂使酶活力下降。固定化酶可以多次利用。本发明得到纯度较高的黄芩素，纯度在95％以上。本发明所述的方法中乙酸乙酯萃取得到黄芩素后，可用有机溶剂重结晶，得到高纯度的黄芩素，纯度在98％以上。
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公开(公告)号：CN108220260A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201711304614.9
申请日：2017-12-11
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种催化柚皮素生成山萘酚的融合酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。本发明通过组合筛选策略获得能有效催化柚皮素生成山萘酚的黄烷酮3‑羟化酶（PeF3H）和黄酮醇合成酶（CuFLS），是目前报道的最佳组合。通过连接肽的筛选，获得了能适合PeF3H和CuFLS功能化融合的连接肽TPTPTPTP，通过该连接肽构建的融合酶（F69）能高效催化柚皮素生成山萘酚。携带该融合酶（F69）的重组菌BL21‑F69，通过高密度发酵，山萘酚的产量达到1010.2 mg/L，是目前报道最高产量的17倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107142287A
公开(公告)日：2017-09-08
申请号：CN201710332991.7
申请日：2017-05-12
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 青蒿醛双键还原酶DBR1及其重组菌在制备二氢‑β‑紫罗兰酮中的应用，该酶或其基因重组菌可以高效转化β‑紫罗兰酮制备二氢‑β‑紫罗兰酮。在加入40μL 1mol/L IPTG，初始OD600为1.8，加入250μL 250mmol/L β‑紫罗兰酮‑乙醇溶液在27℃条件下全细胞转化18小时，二氢‑β‑紫罗兰酮产量达308.3mg/L。酶转化反应体系为500μL，其中β‑紫罗兰酮浓度为1mmol/L，酶添加量约为30U/mg，反应在pH 6.5，45℃下反应60min，二氢β‑紫罗兰酮浓度为76.49mg/L，底物有效转化率为78.77%。
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公开(公告)号：CN106318957A
公开(公告)日：2017-01-11
申请号：CN201610945270.9
申请日：2016-10-26
Applicant: 南京林业大学
CPC classification number: C12N9/2402 , C12P19/60 , C12Y302/0104
Abstract: 土曲霉CCF 3059 α-L-鼠李糖苷酶突变体及其应用，包括如SEQ ID NO:2所示的D594Q基因、SEQ ID NO:3所示的D594R基因、SEQ ID NO:4所示的D594C基因、SEQ ID NO:5所示的G827K基因、SEQ ID NO:6所示的G827M基因和SEQ ID NO:7所示的G828A基因。突变酶MRha-D594Q 最适温度和原酶MRha均为65℃；但与原酶MRha相比，突变酶MRha-D594Q在70℃和75℃时仍保持较高的酶活性；添加山梨醇能够进一步提高突变酶MRha-D594Q的热稳定性，在70℃的半衰期提高了7.8倍。
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公开(公告)号：CN103146723B
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201210549479.5
申请日：2012-12-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种极耐热糖苷酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达与应用，该极耐热糖苷酶基因的DNA序列SEQ NO：1通过密码子的替换和诱导条件的改变，实现了该酶在大肠杆菌中可溶性表达，酶活达到13U/mL，该糖苷酶具有极强的耐热性能和特异性降解人参皂苷Rb1为Rd的能力，该酶在90℃、pH4.8的条件下酶活最高，在温度70-100℃、pH 4.8-8.0的范围内，均保持较高的酶活，该酶对葡萄糖的耐糖系数Ki为1.5mol/L，该酶1U/mL在90℃、pH 5.2、5％甲醇条件下30min可将99％人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd，该极耐热糖苷酶性质优异，可应用于苷元类物质的酶法转化。
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公开(公告)号：CN103146723A
公开(公告)日：2013-06-12
申请号：CN201210549479.5
申请日：2012-12-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种极耐热糖苷酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达与应用，该极耐热糖苷酶基因的DNA序列SEQ NO：1通过密码子的替换和诱导条件的改变，实现了该酶在大肠杆菌中可溶性表达，酶活达到13U/mL，该糖苷酶具有极强的耐热性能和特异性降解人参皂苷Rb1为Rd的能力，该酶在90℃、pH4.8的条件下酶活最高，在温度70-100℃、pH4.8-8.0的范围内，均保持较高的酶活，该酶对葡萄糖的耐糖系数Ki为1.5mol/L，该酶1U/mL在90℃、pH5.2、5％甲醇条件下30min可将99％人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd，该极耐热糖苷酶性质优异，可应用于苷元类物质的酶法转化。
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