公开(公告)号：CN117247979A

公开(公告)日：2023-12-19

申请号：CN202311225587.1

申请日：2023-09-21

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 赵林果 ,  李琦 ,  卢姗 ,  张洋洋 ,  王振中 ,  吴懿 ,  刘栋

IPC: C12P17/06 ,  C12N11/089 ,  C12N11/14 ,  C12N9/24 ,  C12N9/42

Abstract: 本发明公开了一种双固定化酶联用制备淫羊藿素的方法，属于酶工程和生物工程技术领域。包括在缓冲体系中，将第一固定化酶与底物淫羊藿总黄酮反应；反应后移除第一固定化酶，并加入第二固定化酶继续反应，得到淫羊藿素；其中，所述第一固定化酶为α‑L‑鼠李糖苷酶DtRha与环氧基树脂载体通过共价键连接得到；所述固定化酶为多功能糖苷酶Tpebgl3由连接肽介导与沸石载体通过特异性吸附连接得到。本发明实现了将淫羊藿总黄酮全部转化为淫羊藿苷元，本发明大大缩短了淫羊藿苷元的制备工艺，提高了生产效率；且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂，降低了环境污染，适宜于工业化生产。

公开(公告)号：CN116855488A

公开(公告)日：2023-10-10

申请号：CN202310677975.7

申请日：2023-06-08

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 张志洁 ,  吴懿 ,  刘栋 ,  卢姗 ,  朱文慧 ,  王小宇

IPC: C12N11/14 ,  C12N15/70 ,  C07K19/00 ,  C12N9/42 ,  C12P19/60 ,  C12P19/14

Abstract: 一种固定化β‑D‑葡萄糖苷酶的制备方法及其在转化淫羊藿黄酮中的应用，步骤为(1)融合β‑D‑葡萄糖苷酶4LP‑Tpebg13的构建；(2)4LP‑Tpebg13的纯化；(3)沸石活化；(4)4LP‑Tpebg13的固定化；(5)4LP‑Tpebg13的特异性吸附；(6)固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y转化淫羊藿黄酮中的应用。本发明利用Na‑Y沸石为固定化载体，加入融合β‑D‑葡萄糖苷酶4LP‑Tpebg13，构建固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y，其酶活回收率为53.2％，连接肽的引入使蛋白负载量提高了40.0％。含有连接肽的固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y具备更好的结合稳定性、底物亲和力和催化效率。4LP‑Tpebg13@Na‑Y转化淫羊藿黄酮的最适条件为：底物淫羊藿苷浓度为1.4mM，酶用量0.5U/mL，pH 5.0，80℃、反应时间1h，摩尔转化率高达95.7％。连接肽提高了固定化酶的稳定性和重复利用性，重复使用10次后，4LP‑Tpebg13@Na‑Y保留77.1％催化活性，比Tpebg13@Na‑Y高40.9％。