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公开(公告)号：CN104611313A
公开(公告)日：2015-05-13
申请号：CN201510026295.4
申请日：2015-01-19
Applicant: 南京林业大学
CPC classification number: C12N9/2445 , C12P33/20 , C12Y302/01021
Abstract: 一种β-葡萄糖苷酶及其制备方法与应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述β-葡萄糖苷酶热稳定性优异，能耐受高温；本发明所述β-葡萄糖苷酶具有较高β-1,6-糖苷键水解能力同时具有较强的α-1，6-阿拉伯吡喃糖苷键水解能力，对人参皂苷Rb1和Rb2的转化能力强，本发明所述β-葡萄糖苷酶与人参皂苷Rb1和Rb2孵育一定时间后，检测到人参皂苷Rb1或Rb2几乎完全转化为人参皂苷Rd；本发明所述TPEBGL1的制备方法不需要诱导剂IPTG即可高效表达。
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公开(公告)号：CN104328098B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201410510836.6
申请日：2014-09-28
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术及生物医药领域，具体涉及一种β‑葡萄糖苷酶及其制备方法与应用，尤其是应用于酶法转化制备人参皂苷20(S)‑Rg3的应用。本发明所述β‑葡萄糖苷酶能耐受高温，在70℃下保温3h酶活力几乎不变；本发明所述β‑葡萄糖苷酶对人参皂苷Rb1的转化能力强，本发明所述β‑葡萄糖苷酶与人参皂苷Rb1孵育60min，人参皂苷Rb1几乎完全转化为人参皂苷20(S)‑Rg3；本发明所述制备人参皂苷20(S)‑Rg3的方法酶促转化反应中间产物少，转化后产物人参皂苷20(S)‑Rg3纯度高。
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公开(公告)号：CN117247979A
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202311225587.1
申请日：2023-09-21
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12P17/06 , C12N11/089 , C12N11/14 , C12N9/24 , C12N9/42
Abstract: 本发明公开了一种双固定化酶联用制备淫羊藿素的方法，属于酶工程和生物工程技术领域。包括在缓冲体系中，将第一固定化酶与底物淫羊藿总黄酮反应；反应后移除第一固定化酶，并加入第二固定化酶继续反应，得到淫羊藿素；其中，所述第一固定化酶为α‑L‑鼠李糖苷酶DtRha与环氧基树脂载体通过共价键连接得到；所述固定化酶为多功能糖苷酶Tpebgl3由连接肽介导与沸石载体通过特异性吸附连接得到。本发明实现了将淫羊藿总黄酮全部转化为淫羊藿苷元，本发明大大缩短了淫羊藿苷元的制备工艺，提高了生产效率；且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂，降低了环境污染，适宜于工业化生产。
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公开(公告)号：CN117210449A
公开(公告)日：2023-12-12
申请号：CN202311263539.1
申请日：2023-09-27
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N11/089 , C12N9/24 , C12P19/60
Abstract: 本发明公开了一种固定化α‑L‑鼠李糖苷酶及其制备方法和应用，固定化α‑L‑鼠李糖苷酶包括环氧树脂载体和α‑L‑鼠李糖苷酶，所述α‑L‑鼠李糖苷酶与所述环氧树脂载体通过共价键连接；所述α‑L‑鼠李糖苷酶为粗酶；所述环氧树脂载体为ES‑107T或EG‑1环氧树脂。本发明通过固定化α‑L‑鼠李糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶两个酶的联用，实现直接从淫羊藿总黄酮到淫羊藿苷元的转化，本发明大大缩短了淫羊藿苷元的制备工艺，提高了生产效率；且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂，降低了环境污染，适宜于工业化生产。
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公开(公告)号：CN107641621B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN201710448315.6
申请日：2017-06-14
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及酶工程及生物医药技术领域，尤其涉及一种糖苷酶组合物及酶法制备淫羊藿苷元的方法。本发明筛选获得了一种能有效降解淫羊藿苷母核结构上鼠李糖残基的α‑L‑鼠李糖苷酶及能高效降解其母核结构中葡萄糖残基耐高温β‑葡萄糖苷酶，随后通过双酶转化高效制备具有完全保持原有生物活性的淫羊藿苷元。本发明提供的组合物中，两种糖苷酶的最适反应温度都较高，底物溶解性较好，不需要助溶剂；并且酶解时间短，得率高。实验表明，采用本发明提供的糖苷酶组合物对淫羊藿苷进行酶解，摩尔转化率为98.3％，淫羊藿苷元的得率为90％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105238826B
公开(公告)日：2019-02-05
申请号：CN201510812991.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
IPC: C12P17/06
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别涉及β‑葡萄糖苷酶的用途及用其制备黄芩素的方法。所述β‑葡萄糖苷酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了酶水解黄芩苷的方法，将一种耐热耐糖β‑葡萄糖苷酶固定化后在缓冲溶液中将黄芩苷水解，获得黄芩素。该酶具有很强的产物耐受性，无需在双相体系中就能将黄芩苷水解完全，避免了双相体系中的有机溶剂使酶活力下降。固定化酶可以多次利用。本发明得到纯度较高的黄芩素，纯度在95％以上。本发明所述的方法中乙酸乙酯萃取得到黄芩素后，可用有机溶剂重结晶，得到高纯度的黄芩素，纯度在98％以上。
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公开(公告)号：CN104651336B
公开(公告)日：2018-02-09
申请号：CN201510053105.8
申请日：2015-02-02
Applicant: 南京林业大学
Abstract: α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶及其在制备人参皂苷Rd中的应用，属于基因工程技术及生物医药领域，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶对人参皂苷Rc的转化能力强，本发明所述α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶与人参皂苷Rc孵育一定时间后经检测，人参皂苷Rc几乎完全转化为人参皂苷Rd。本发明所述α‑L‑阿拉伯呋喃糖苷酶对阿拉伯糖具有较高的耐受能力，且不被葡萄糖反馈抑制。
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公开(公告)号：CN117187216B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202311263540.4
申请日：2023-09-27
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明从Dictyoglomus thermophilum DSM 3960基因组中克隆得到一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，与现有技术相比，本发明所提供的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha具有优良的耐热性能，对耐热的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha进行耐糖关键位点突变，获得的新型α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha耐糖突变体，其耐糖系数提高了2.3倍以上，该突变体能够特异性水解淫羊藿苷的R2位上通过α‑1糖苷键连接的鼠李糖，能够利用突变体高效转化淫羊藿苷生成淫羊藿次苷I。
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公开(公告)号：CN107354143A
公开(公告)日：2017-11-17
申请号：CN201710689763.5
申请日：2017-08-11
Applicant: 南京林业大学 , 江苏康缘药业股份有限公司
CPC classification number: Y02P20/588 , C12N11/08 , C12N9/2445 , C12P19/14 , C12Y302/01021
Abstract: 一种固定化β-葡萄糖苷酶及其制备方法和应用，步骤为（1）大孔树脂预处理；（2）大孔吸附树脂NKA-9聚醚酰亚胺表面改性；（3）大孔树脂吸附β-葡萄糖苷酶；（4）戊二醛交联反应修饰。本发明首次利用金属离子Zn2+作为利用大孔吸附树脂固定化β-葡萄糖苷酶的激活剂、热稳定剂。Zn2+的参与使β-葡萄糖苷酶的催化效率提高了20%以上；使固定化酶NKA-9II的催化效率提高了92%以上。相对于起始酶活，Zn2+的参与，在85℃条件下，温育7 h，固定化酶NKA-9II的酶活还保持在80%以上；90℃条件下温育7 h，固定化酶NKA-9II的酶活还保持在54%以上。
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公开(公告)号：CN104611313B
公开(公告)日：2017-11-17
申请号：CN201510026295.4
申请日：2015-01-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种β‑葡萄糖苷酶及其制备方法与应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述β‑葡萄糖苷酶热稳定性优异，能耐受高温；本发明所述β‑葡萄糖苷酶具有较高β‑1,6‑糖苷键水解能力同时具有较强的α‑1，6‑阿拉伯吡喃糖苷键水解能力，对人参皂苷Rb1和Rb2的转化能力强，本发明所述β‑葡萄糖苷酶与人参皂苷Rb1和Rb2孵育一定时间后，检测到人参皂苷Rb1或Rb2几乎完全转化为人参皂苷Rd；本发明所述TPEBGL1的制备方法不需要诱导剂IPTG即可高效表达。
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