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公开(公告)号：CN111471669B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201910747051.3
申请日：2019-08-14
Applicant: 南京汉欣医药科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种肝素裂解酶突变体及其重组表达的方法，属于生物工程技术领域。本发明提供的肝素裂解酶III有更高的催化效率和热稳定性，突变体S264F/Y490K/D321N的催化效率比原始菌株提高了1.68倍，更有利于低分子量肝素的制备。本发明还对来自变形拟杆菌来源的肝素裂解酶III进行了异源重组表达，胞内酶活可以达到4000U/L以上。
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公开(公告)号：CN117467632B
公开(公告)日：2024-09-24
申请号：CN202210889750.3
申请日：2022-07-27
Applicant: 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种肝素N‑磺基转移酶突变体构建方法，属于生物工程技术领域。本发明对人源的双功能酶(NCBI Reference Sequence:NP_001534.1)中的硫酸乙酰肝素N‑磺基转移酶1进行了改造，通过截短、单点突变、多点组合突变等生物技术手段，获得了能够使得稳定性和催化效率显著提升的肝素N‑磺基转移酶突变体。本发明提供的人源肝素N‑磺基转移酶突变体催化效率比人源肝素N‑磺基转移酶原始菌株提高了1.3倍，且在37℃下的稳定性也较野生型有显著提升，更有利于长时间催化获得高转化率的N‑磺酸化肝素前体。
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公开(公告)号：CN114763518B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202111062175.1
申请日：2021-09-10
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/65 , C12N15/64 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12N15/61 , C12P19/26 , C12R1/84 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了发酵生产肝素的酵母工程菌的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先将肝素合成途径中的外源基因肝素前体合酶基因kfiC，α4‑N‑乙酰氨基葡糖转移酶酶基因kfiA和UDP‑葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD分别整合到毕赤酵母和酿酒酵母基因组中，初步构建了肝素前体合成途径，之后分别在毕赤酵母和酿酒酵母中表达筛选并优化N‑脱乙酰磺酸转移酶、葡萄糖醛酸C5‑变构酶、磺酸乙酰肝素2‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素6‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素3‑磺酸转移酶，得到合成不同磺酸化程度的磺酸乙酰肝素的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同磺酸化程度的肝素。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110042068B
公开(公告)日：2020-09-08
申请号：CN201910308247.2
申请日：2019-04-17
Applicant: 美药星(南京)制药有限公司 , 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种改造信号肽提高肠激酶分泌表达量的方法，属于基因工程技术领域。本发明是以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115作为出发菌株，通过同源重组的方法替换掉α‑factor信号肽的Pre‑region区域，提高肠激酶分泌效率的一种方法。本发明的Sekd信号肽与原始的α‑factor信号肽相比，酶活提高4.2倍，解决了肠激酶胞外分泌量低的问题，为进一步提高工业化生产肠激酶的表达量奠定了基础。
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公开(公告)号：CN110042068A
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201910308247.2
申请日：2019-04-17
Applicant: 美药星(南京)制药有限公司 , 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种改造信号肽提高肠激酶分泌表达量的方法，属于基因工程技术领域。本发明是以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115作为出发菌株，通过同源重组的方法替换掉α-factor信号肽的Pre-region区域，提高肠激酶分泌效率的一种方法。本发明的Sekd信号肽与原始的α-factor信号肽相比，酶活提高4.2倍，解决了肠激酶胞外分泌量低的问题，为进一步提高工业化生产肠激酶的表达量奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111471669A
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201910747051.3
申请日：2019-08-14
Applicant: 江南大学 , 美药星(南京)制药有限公司 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种肝素裂解酶突变体及其重组表达的方法，属于生物工程技术领域。本发明提供的肝素裂解酶III有更高的催化效率和热稳定性，突变体S264F/Y490K/D321N的催化效率比原始菌株提高了1.68倍，更有利于低分子量肝素的制备。本发明还对来自变形拟杆菌来源的肝素裂解酶III进行了异源重组表达，胞内酶活可以达到4000U/L以上。
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公开(公告)号：CN117384812A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311320966.9
申请日：2023-10-12
Applicant: 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种生产肝素前体的重组大肠杆菌及其构建和应用。本发明以益生菌大肠杆菌Nissle 1917为宿主，通过研究KfiB在肝素前体合成中的作用并研究KfiB和肝素前体合酶KfiAC之间的量级变化来设计提高肝素前体的产量，明确了kfiACB表达的最优结构，通过不同组合优化肝素前体产量达到0.349g/L，并在突变文库中筛选RBS进一步优化kfiACB的表达量，肝素前体产量在摇瓶上可以达到0.97g/L，相比于野生型菌株产量提高了6倍以上。
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公开(公告)号：CN117467632A
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202210889750.3
申请日：2022-07-27
Applicant: 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种肝素N‑磺基转移酶突变体构建方法，属于生物工程技术领域。本发明对人源的双功能酶(NCBI Reference Sequence:NP_001534.1)中的硫酸乙酰肝素N‑磺基转移酶1进行了改造，通过截短、单点突变、多点组合突变等生物技术手段，获得了能够使得稳定性和催化效率显著提升的肝素N‑磺基转移酶突变体。本发明提供的人源肝素N‑磺基转移酶突变体催化效率比人源肝素N‑磺基转移酶原始菌株提高了1.3倍，且在37℃下的稳定性也较野生型有显著提升，更有利于长时间催化获得高转化率的N‑磺酸化肝素前体。
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