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公开(公告)号:CN114763518B
公开(公告)日:2023-04-28
申请号:CN202111062175.1
申请日:2021-09-10
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/65 , C12N15/64 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12N15/61 , C12P19/26 , C12R1/84 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了发酵生产肝素的酵母工程菌的构建及其应用,属于生物工程技术领域。本发明首先将肝素合成途径中的外源基因肝素前体合酶基因kfiC,α4‑N‑乙酰氨基葡糖转移酶酶基因kfiA和UDP‑葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD分别整合到毕赤酵母和酿酒酵母基因组中,初步构建了肝素前体合成途径,之后分别在毕赤酵母和酿酒酵母中表达筛选并优化N‑脱乙酰磺酸转移酶、葡萄糖醛酸C5‑变构酶、磺酸乙酰肝素2‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素6‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素3‑磺酸转移酶,得到合成不同磺酸化程度的磺酸乙酰肝素的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同磺酸化程度的肝素。
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公开(公告)号:CN117384812A
公开(公告)日:2024-01-12
申请号:CN202311320966.9
申请日:2023-10-12
Applicant: 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种生产肝素前体的重组大肠杆菌及其构建和应用。本发明以益生菌大肠杆菌Nissle 1917为宿主,通过研究KfiB在肝素前体合成中的作用并研究KfiB和肝素前体合酶KfiAC之间的量级变化来设计提高肝素前体的产量,明确了kfiACB表达的最优结构,通过不同组合优化肝素前体产量达到0.349g/L,并在突变文库中筛选RBS进一步优化kfiACB的表达量,肝素前体产量在摇瓶上可以达到0.97g/L,相比于野生型菌株产量提高了6倍以上。
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