黄酮3β-羟化酶还原酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN112391360B

    公开(公告)日:2022-09-06

    申请号:CN202011213591.2

    申请日:2020-11-04

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了黄酮3β‑羟化酶还原酶突变体及其应用,属于基因工程技术领域。本发明通过对黄酮3β‑羟化酶还原酶进行突变,获得了能够提高催化和生产性能的黄酮3β‑羟化酶还原酶突变体,将得到的突变体在酿酒酵母中,协助黄酮3β‑羟化酶进行转化,能够使得圣草酚含量较亲本的805.6mg/L提高至980.9mg/L~1052.1mg/L,提高了21.8%~30.6%。因而本发明获得的黄酮3β‑羟化酶还原酶突变体具备广阔的应用前景。

    一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包

    公开(公告)号:CN114606256A

    公开(公告)日:2022-06-10

    申请号:CN202210436848.3

    申请日:2022-04-14

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包,属于基因工程和代谢工程领域。通过将筛选基因KlLEU2的起始密码子替换为GUG,从而构建得到了一组能够实现高拷贝整合的表达框,将表达框整合至酿酒酵母中,可实现外源基因的高效、稳定表达。可使目的荧光蛋白表达强度显著提升至改造前的10倍左右,并使转化子数量也降低至20~40个,更有利于简化筛选流程、提升筛选效率。本发明的多拷贝整合质粒将有利于在微生物中过表达目的蛋白。

    一种高通量检测柚皮素的方法

    公开(公告)号:CN109580604A

    公开(公告)日:2019-04-05

    申请号:CN201811469336.7

    申请日:2018-11-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高通量检测柚皮素的方法。属于合成生物技术领域。本发明使用的显色剂为氢氧化钠或者氢氧化钾。经处理后,柚皮素呈现黄色,浓度越高,黄色越深,且显色越快,一般5min内反应完毕。即便在干扰物质对香豆酸存在时也可以直接用目视法选择高产菌株。该反应液也可以使用酶标仪做进一步检测。在对香豆酸存在时,建议使用KOH处理,此时柚皮素的最佳检测波长为410-430nm。该方法简便高效,抗干扰,精准度高,成本低廉,适用于高通量筛选柚皮素高产菌株。

    一种截短的苦参异戊烯基转移酶及其应用

    公开(公告)号:CN113388594B

    公开(公告)日:2022-11-04

    申请号:CN202110637213.5

    申请日:2021-06-08

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种截短的苦参异戊烯基转移酶及其应用,属于生物工程领域。本发明在苦参来源的异戊烯基转移酶SfN8DT‑1的基础上对N端分别进行了不同位点的截短,构建了重组质粒pY26‑SfN8DT‑1以及7个截短后的异戊烯基转移酶突变体质粒。将重组质粒转入酿酒酵母后,得到了从头合成8‑异戊烯基柚皮素的酿酒酵母重组菌。其中重组酿酒酵母在YPD培养基中发酵120h后最高能够生产9.33mg/L 8‑异戊烯基柚皮素,相对于对照菌株PN01‑pY26‑SfN8DT‑1提高了290.10%,是目前报道的生物合成8‑异戊烯基柚皮素的最高产量。该策略为代谢工程改造酿酒酵母生产8‑异戊烯基柚皮素奠定了基础。

    用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包

    公开(公告)号:CN114574517A

    公开(公告)日:2022-06-03

    申请号:CN202210208817.2

    申请日:2022-03-04

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包,属于基因工程和代谢工程领域。通过更换起始密码子降低了TPR1的表达强度,获得了可用于酿酒酵母基因组高拷贝整合的重组质粒。更换TRP1的启动子为AAG或者GUG后的TRR1AAGdeg和TRR1GUGdeg具有良好的高拷贝整合能力,使转化后的菌株的荧光强度显著提升且降低了转化子数量,提升了筛选效率并有助于获得更高拷贝的菌株。对基因在酵母中过量表达基因和蛋白质有广阔的应用前景。

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