一种草酸脱羧酶的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN106939315A

    公开(公告)日:2017-07-11

    申请号:CN201710015055.3

    申请日:2017-01-09

    CPC classification number: C12N9/88 C12N15/75 C12N2830/34 C12Y401/01002

    Abstract: 本发明公开了一种草酸脱羧酶的制备方法,首先构建包含芽胞杆菌属的酸诱导启动子和分泌信号肽以及在其调控下配置的真菌来源的草酸脱羧酶基因的重组表达质粒载体,用该载体转化可以在pH≤4.5下正常生长的芽胞杆菌,制备草酸脱羧酶重组菌。将该重组菌在发酵培养基中培养补加酸后进行诱导,通过简单纯化回收产生的胞外草酸脱羧酶。本发明方法制备的胞外草酸脱羧酶用于诊断试剂原料,药物组合物、保健食品或特殊医学用途配方食品的原料。采用突变的酸诱导启动子替换重组表达载体中的原始酸诱导启动子,转化芽胞杆菌能获得更高的表达量。

    一种用于大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌的高效穿梭质粒

    公开(公告)号:CN106497960A

    公开(公告)日:2017-03-15

    申请号:CN201611038010.X

    申请日:2016-11-23

    CPC classification number: C12N15/74 C12N2800/101 C12N2820/55 C12N2830/34

    Abstract: 本发明涉及一种用于大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌的高效穿梭质粒、制备方法及其应用,穿梭质粒的基因序列如SEQ ID NO.1所示,是在质粒pPM5的基础上进行改造的,先将鸭疫里默氏杆菌复制起始基因(pRA0726 ori)克隆到此质粒中,然后将转移位点(oriT)克隆到上述质粒中,使此穿梭质粒能够通过高效的结合转移导入鸭疫里默氏杆菌中,且能稳定的复制。为了方便基因片段插入穿梭质粒上且提高基因的表达量,将在穿梭质粒上克隆一段带有多个内切酶位点的高表达启动子序列(High EXP)。本发明所得穿梭质粒可以在鸭疫里默氏杆菌中稳定存在,用于基因敲除株的回补。质粒较小且具有多个多克隆位点,易于操作。结合转移效率非常高。

    重组表达载体及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN107354172A

    公开(公告)日:2017-11-17

    申请号:CN201710371937.3

    申请日:2017-05-24

    Abstract: 本发明公开了一种优化的动物蛋白基因OCX-36及其原核表达载体的构建方法和应用,采取的技术方案是对OCX-36基因稀有密码子进行改造优化,并切除了信号肽,将优化的OCX-36基因与载体连接,构建重组质粒pMD-19T-OCX-36,转入到大肠杆菌C41(DE3)感受态细胞中,筛选阳性克隆进行培养、蛋白表达,菌体细胞超声破碎、离心、收集上清液经一次镍柱亲和层析即可获得蛋白rOCX-36。本发明通过对OCX-36基因序列的优化,实现了蛋白rOCX-36的可溶性表达,解决了其难于原核表达的技术问题,表达蛋白对患有结肠炎的小鼠具有明显改善病情的效果,显示rOCX-36可用于制备治疗结肠炎的药物。

    一种防治农作物半翅目害虫的方法

    公开(公告)号:CN107058376A

    公开(公告)日:2017-08-18

    申请号:CN201710358776.4

    申请日:2017-05-19

    Applicant: 浙江大学

    Inventor: 许超 沈志成

    CPC classification number: C07K14/325 C12N15/82 C12N15/8286 C12N2830/34

    Abstract: 本发明公开了一种防治农作物半翅目害虫的方法,所述方法是在农作物中表达抗虫蛋白,所述抗虫蛋白为Bt抗虫蛋白Cry30Ca。对于抗虫基因cry30Ca,利用合适的启动子,可以保证在高效表达该抗虫基因的同时,提高植物体内抗虫蛋白表达的稳定性;cry30Ca基因所编码的抗虫蛋白Cry30Ca,具有抗半翅目昆虫,特别是飞虱科的活性,将其转入农作物,能够使转基因植物获得抗半翅目,特别是飞虱科昆虫的能力,减少农业生产中的产量损失、降低农业生产成本。

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