公开(公告)号：KR101530210B1

公开(公告)日：2015-06-22

申请号：KR1020140135330

申请日：2014-10-07

Applicant: 충남대학교산학협력단 ,  한국과학기술원

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  씨리너스화 ,  오명진 ,  김정회 ,  이성현 ,  박승열

IPC: C07K1/14 ,  G01N33/68

CPC classification number: C12Q1/6886

Abstract: 본발명은바이오마커로서부위특이적으로 N-당쇄화된당펩타이드를이용하여바이오마커의 N-당쇄변화를탐지하는방법에관한것이다. 좀더 구체적으로, 본발명에서는비특이적단백질분해효소를이용하여혈액의햅토글로빈을펩타이드와당펩타이드로분해하였으며, 207번과 211번등 총 4개의 N-당쇄화부위를가진당펩타이드만을분리하였다. 본발명자들은이렇게얻은 4개의 N-당쇄화부위에결합된당펩타이드를이용하여종양특이적바이오마커를발굴함으로써고특이적이고고감도인종양의 N-당쇄변화를탐지하는방법을발명하기에이르렀다.

Abstract translation: 本发明涉及使用N-糖肽作为生物标志物的特殊部位检测生物标志物的N-糖交换的方法。 更具体地，本发明用非特异性蛋白质分解酶将血液的触珠蛋白溶解成肽和糖肽，并分离总共四个N-糖基化部分的糖肽，包括数字207,211等。本发明的发明人发现 具有与N-糖基化部分结合的糖肽的肿瘤特异性生物标志物，本发明人能够找到检测高特异性和高敏感性肿瘤的N-糖交换的方法。

公开(公告)号：KR101456096B1

公开(公告)日：2014-11-03

申请号：KR1020130036748

申请日：2013-04-04

Applicant: 충남대학교산학협력단

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  한찬영

IPC: G01N33/53 ,  G01N33/68 ,  G01N30/00

CPC classification number: G01N33/66 ,  G01N2030/8822

Abstract: 본 발명은 인간 혈청 N-당쇄 지도, 인간 혈청 N-당쇄 라이브러리 및 이를 이용하여 혈청 시료를 검증하는 방법에 관한 것이다. 정상인과 환자의 혈청시료 200여 개로부터 당쇄를 분리하여 분석한 결과, 정상인과 환자 모두에게서 100% 발견되는 18개의 기본 당쇄를 찾아내었다. 이 기본 당쇄 18종의 존재는 인간 혈청시료가 채취 및 처리과정에서 문제가 없음을 검증하는데 이용될 수 있다.
또한, 본 발명자들은 인간 혈청 단백질의 N-당쇄는 이론적으로는 가능한 당쇄 종류가 매우 많지만, 실제로 N-당쇄는 도 3에 나타낸 것과 같은 구조만이 존재함을 밝혔으며, 존재하는 구조의 N-당쇄들의 출현 백분율을 밝힘으로써 출현 확률이 낮은 N-당쇄들을 특정 질환의 마커로 사용할 수 있음을 밝혔다.

公开(公告)号：KR1020130114407A

公开(公告)日：2013-10-18

申请号：KR1020120036738

申请日：2012-04-09

Applicant: 충남대학교산학협력단

Inventor： 안현주 ,  칼리토레브릴라 ,  유종신 ,  박건욱

IPC: C12Q1/00 ,  C12N13/00 ,  C12Q1/34

CPC classification number: C07H1/06 ,  C12Y305/01052 ,  G01N27/62 ,  G01N2400/10 ,  H01J49/26

Abstract: PURPOSE: A method for selectively isolating a cell membrane for detecting sugar chains contained in the cell membrane by mass spectroscopy is provided to effectively isolate the cell membrane and to enhance sensitivity and accuracy in sugar chain analysis. CONSTITUTION: A method for selectively isolating a cell membrane for detecting sugar chains contained in the cell membrane by mass spectroscopy comprises the steps of: adding a stabilizing buffer solution to cells, which contains sodium hydrate and/or potassium hydroxide, a protease inhibitor, and sugar and does not contain a surfactant and a chelating agent; treating the container containing the buffer solution and the cells on the ice by ultrasonic waves and destructing the cells; centrifuging the cell lysate and removing a nuclear fraction and residues; adding the buffer solution to the supernatant; ultracentrifuging the supernatant mixture and removing a cytoplasmic fraction; resuspending the precipitate in a Na2CO3 solution (pH 11) and destroying microsome; ultracentrifuging the secondary mixture twice and removing the supernatant containing the cytoplasmic fraction; and isolating a cell membrane fraction.

Abstract translation: 目的：提供用于通过质谱法选择性分离用于检测细胞膜中所含糖链的细胞膜的方法，以有效地分离细胞膜并提高糖链分析的灵敏度和准确性。 构成：用于通过质谱法选择性分离用于检测细胞膜中所含糖链的细胞膜的方法包括以下步骤：将稳定缓冲溶液加入含有水合钠和/或氢氧化钾的蛋白酶抑制剂和 糖，不含表面活性剂和螯合剂; 通过超声波处理含有缓冲溶液的容器和冰上的细胞并破坏细胞; 离心细胞裂解物并除去核心部分和残留物; 将缓冲溶液加入上清液; 超离心上清混合物并除去细胞质级分; 将沉淀物重悬于Na 2 CO 3溶液（pH11）中并破坏微粒体; 将二次混合物超速离心两次并除去含有细胞质级分的上清液; 并分离细胞膜级分。

公开(公告)号：KR101712368B1

公开(公告)日：2017-03-06

申请号：KR1020160099406

申请日：2016-08-04

Applicant: 충남대학교산학협력단 ,  (주)글라이칸

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  오명진 ,  김운용 ,  이주아 ,  백학선 ,  이성현

IPC: G01N33/68

CPC classification number: G01N33/68 ,  G01N33/6893 ,  G01N33/6848 ,  G01N2560/00 ,  G01N2800/50

Abstract: 과제: 단백질의당쇄화는체내외환경변화에매우민감하여암을포함한다양한질병에직접적으로관련되어진단시스템에활용하려는연구가진행되고있다. 당사슬을이용한질병진단방법은매우효율적이나, 당사슬을분리하여진단에사용할경우시료전처리, 질량분석및 데이터처리에많은시간과노력이요구되고원하지않는인공조성물이생성될수 있다. 해결수단: 이를최소화하고자당쇄화된단백질을있는그대로분석하여암진단에적용하는새로운암진단분석방법을발명하였다. 본발명에서는다량체구조의햅토글로빈의이황화결합을절단하여알파사슬과베타사슬로분리한후 전분자량을측정함으로써베타사슬의당쇄화패턴을분석하였다. 당사슬을분리하지않고이황화결합절단이라는최소한의전처리만수행한후 10분이내의짧은질량분석시간소요및 신속한데이터처리를통해단백질의당쇄화패턴을인식함으로써질병진단시빠르고정확한진단방법으로활용할수 있다.

公开(公告)号：KR101479622B1

公开(公告)日：2015-01-06

申请号：KR1020140076237

申请日：2014-06-23

Applicant: 충남대학교산학협력단

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  정하늘 ,  오명진

IPC: C07H1/06

CPC classification number: C08H1/00 ,  C08B37/0003 ,  C08B37/006 ,  C12P19/12 ,  C12Y114/18001 ,  C12Y305/01052

Abstract: 본 발명은 비드 고정화 (Bead Immobiliization) 방법을 이용하여 N-당쇄와 O-당쇄가 동시에 존재하는 당단백질에서 O-당쇄만을 선택적으로 추출 및 분리할 수 있는 방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로는 N-당쇄와 O-당쇄가 모두 존재하는 당단백질을 비드에 고정시키고 N-당쇄만 선택적으로 분리할 수 있는 특이적 효소인 PNGase F를 이용하여 N-당쇄를 제거한 후 β-제거 (β-elimination)를 통해 O-당쇄만을 선택적으로 분리하는 것이다. 본 발명의 비파괴적인 O-당쇄 분리방법은 다양한 당단백질에서 O-당쇄 분석에 효과적으로 이용될 수 있다.

Abstract translation: 本发明涉及一种使用珠固定技术从N-糖苷和O-聚糖同时存在的糖蛋白中仅选择性提取和分离O-聚糖的方法。 更具体地说，通过使用能够将N-聚糖和O-聚糖同时存在的糖蛋白固定在珠粒上并能够选择性分离N-聚糖的特异性酶的PNGase F，除去N-聚糖，仅将O-聚糖 通过β-消除选择性分离。 用于分离本发明的O-聚糖的非破坏性方法可以有效地用于分析各种糖蛋白中的O-聚糖。

公开(公告)号：KR101479207B1

公开(公告)日：2015-01-05

申请号：KR1020130036752

申请日：2013-04-04

Applicant: 충남대학교산학협력단

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  레브릴라칼리토

IPC: G01N33/574 ,  G01N33/66 ,  G01N33/48 ,  G01N33/53

Abstract: 본 발명은 인간 혈청 글라이콤 지도 및 이를 이용하여 난소암 환자의 혈청 시료를 검증하여 얻어진 인간 난소암 마커에 관한 것이다. 본 발명자들은 인간 혈청 단백질의 N-당쇄는 이론적으로는 가능한 당쇄 종류가 매우 많지만, 실제로 N-당쇄는 도 3에 나타낸 것과 같은 구조만이 존재함을 밝혔으며, 존재하는 구조의 N-당쇄들의 출현 백분율을 밝힘으로써 출현 확률이 낮은 N-당쇄들을 특정 질환의 마커로 사용할 수 있음을 밝혔다.

公开(公告)号：KR101864161B1

公开(公告)日：2018-06-04

申请号：KR1020170143035

申请日：2017-10-31

Applicant: 충남대학교산학협력단

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  김범진

IPC: G01N33/487 ,  G01N27/62

CPC classification number: G01N33/487 ,  G01N27/62 ,  G01N2400/00 ,  G01N2560/00

Abstract: 본발명은정상인타액내 존재하는 N-당사슬에대한정보및 특성을질량분석을기반으로파악하여인간타액 N-당사슬분석결과를표준화·시각화한것에관한것이다. 인간타액을대상으로 N-당사슬을분리및 정제하여질량분석을수행한결과, 타액에서검출되는 N-당사슬이표 2에표시한 28종의 N-당사슬을모두포함하고있어야하며, 타액에서검출된전체 N-당사슬중에퓨코스를함유하고있는 N-당사슬의상대적함량의총합이 50% 이상이어야하며, 타액에서검출된 N-당사슬의개수(n)가전체당사슬 (Total): 50 ~ 148개, High mannose (HM) 타입: 4 ~ 6개, Complex/hybrid (C/H) 타입: 7 ~ 15개, Complex/hybrid with fucose (C/H-F) 타입: 26 ~ 70개의범위에포함되어야만정상인간타액으로판정할수 있으며, 이를분석결과의품질관리, 질병메커니즘연구, 질병진단용바이오마커발굴연구등에응용할수 있다.

公开(公告)号：KR101748588B1

公开(公告)日：2017-06-19

申请号：KR1020150190775

申请日：2015-12-31

Applicant: 충남대학교산학협력단

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  권용일 ,  정승협 ,  오명진

IPC: G01N1/28 ,  G01N1/38 ,  G01N1/44 ,  G01N27/62

Abstract: 본발명은난소암진단용 N-당사슬마커에관한것으로서, 혈청, 혈액, 복수등을포함한체액및 조직에서유래된당단백질시료가대용량일경우높은재현성을보장하면서기존의방법보다고속으로당사슬을추출하는자동화시스템을이용하고고감도고분해능질량분석기를이용하여대량의시료로부터난소암진단용 N-당사슬마커를탐지하는방법및 탐지한난소암진단용 N-당사슬빈도마커(frequency marker) 및정량마커(abundance marker)에관한것이다.

公开(公告)号：KR101672717B1

公开(公告)日：2016-11-17

申请号：KR1020150082601

申请日：2015-06-11

Applicant: 충남대학교산학협력단 ,  한국기초과학지원연구원

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  김범진 ,  최종순 ,  이동기 ,  권요셉

IPC: G01N27/62 ,  G01N33/487 ,  G01N1/28 ,  G01N1/40 ,  H01J49/40 ,  H01J49/04

CPC classification number: G01N1/28 ,  G01N1/40 ,  G01N27/62 ,  G01N33/487 ,  H01J49/04 ,  H01J49/40

Abstract: 본발명은인간타액특이적당사슬을이용하여인간타액을검증하는방법에관한것이다. 인간타액을비롯한인간체액들과쥐 타액등을대상으로 N-당사슬을분리및 정제하여질량분석을수행한결과, 인간타액에는네 개이상의퓨코스를포함하는고퓨코실화 N-당사슬이 50% 이상함유되어다른인간체액이나다른동물의타액과구별되는특징이있어, 법의학분야등에응용할수 있다.

Abstract translation: 本发明涉及通过使用人唾液特异性糖链检测人唾液的方法。 通过使用包含人唾液，大鼠唾液等的人体液体的N-聚糖分离和纯化进行质谱分析，结果表明，人唾液与其他动物的其他人体液或唾液不同，其特征在于由 包含至少4个岩藻糖的至少50％高度岩藻糖化的N-聚糖，因此本发明可以应用于取证领域等。

公开(公告)号：KR1020140120654A

公开(公告)日：2014-10-14

申请号：KR1020130036752

申请日：2013-04-04

Applicant: 충남대학교산학협력단

Inventor： 안현주 ,  김재한 ,  레브릴라칼리토

IPC: G01N33/574 ,  G01N33/66 ,  G01N33/48 ,  G01N33/53

Abstract: 본 발명은 인간 혈청 글라이콤 지도 및 이를 이용하여 난소암 환자의 혈청 시료를 검증하여 얻어진 인간 난소암 마커에 관한 것이다. 본 발명자들은 인간 혈청 단백질의 N-당쇄는 이론적으로는 가능한 당쇄 종류가 매우 많지만, 실제로 N-당쇄는 도 3에 나타낸 것과 같은 구조만이 존재함을 밝혔으며, 존재하는 구조의 N-당쇄들의 출현 백분율을 밝힘으로써 출현 확률이 낮은 N-당쇄들을 특정 질환의 마커로 사용할 수 있음을 밝혔다.

Abstract translation: 本发明涉及一种通过使用人血清葡萄糖图谱验证卵巢癌患者的血清样品获得的人血清葡萄糖图和人卵巢癌标记。 本发明人发现，尽管人血清蛋白的N-糖链包括大量理论上可能的糖链，但实际上仅存在如图3所示的结构。 此外，本发明人确定具有现有结构的N-糖链的出现百分比，从而发现具有低出现概率的N-糖链可用作特定疾病的标记物。