Abstract:
Un método para acoplar al menos dos oligonucleótidos para producir un oligonucleótido acoplado y amplificar el oligonucleótido acoplado, en el que el acoplamiento y la amplificación se producen en una única mezcla de reacción, comprendiendo dicho método las etapas, en combinación, de: a) poner en contacto una proteína diana o analito con al menos una primera y una segunda sonda, teniendo cada sonda una especificidad de unión por la proteína o el analito y estando unida al menos a un tipo de oligonucleótido; b) acoplar entre sí los oligonucleótidos sobre la primera y la segunda sonda empleando (i) una ligasa seleccionada del grupo que consiste en la ligasa de SEQ ID NO:77, la ligasa de SEQ ID NO:78, la ligasa de SEQ ID NO:79, la ligasa de SEQ ID NO:80, la ligasa de SEQ ID NO:81, la ligasa de SEQ ID NO:82, y sus combinaciones, y (ii) un puente oligonucleotídico, en el que dicho puente oligonucleotídico comprende un extremo 3' de cuatro a nueve bases de longitud, y un extremo 5' de cuatro a nueve bases de longitud, para producir un ácido nucleico diana y amplificar el ácido nucleico diana; y, c) detectar el ácido nucleico diana amplificado