公开(公告)号：KR1019990084508A

公开(公告)日：1999-12-06

申请号：KR1019980016310

申请日：1998-05-07

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 두산

Inventor： 이상기 ,  배정훈 ,  최의성 ,  손정훈 ,  강현아 ,  박장서

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/63

Abstract: 본 발명은 피치아 시페리(Pichia ciferrii)용 발현 플라스미드에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 피치아 시페리 유래의 리보좀 DNA, 항생제 시클로헥시미드(cycloheximide)에 대해 저항성을 갖는 CYH
r 유전자, 및 목적 유전자로 구성되는 플라스미드에 관한 것이다.
본 발명에 의해 제공되는 플라스미드를 이용하면 피치아 시페리에의 형질전환 효율이 높다.

公开(公告)号：KR1019970021313A

公开(公告)日：1997-05-28

申请号：KR1019950034819

申请日：1995-10-11

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 이상기 ,  손정훈 ,  김철호 ,  최의성

IPC: C12N15/81

Abstract: 본 발명은 메탄올 자화 효모(methylotrophic yeast)로부터 이종단백질을 생산하는 방법에 관한 것으로, 이종 단백질 유전자를 함유하는 재조합 메탄올 자화 효모 배양배지에 오일을 첨가하여 배양하는 방법에 의하면 이종 단백질의 생산성을 향상시킬 수 있으며, 특히 메탄올 옥시다제(Methanol Oxidase : MOX) 프로모터와 MOX 터미네이터 서열 및 히루딘 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환된 메탄올 자화 효모를 이용하면 히루딘을 효율적으로 생산할 수 있다.

公开(公告)号：KR1019960010682A

公开(公告)日：1996-04-20

申请号：KR1019940022499

申请日：1994-09-07

Applicant: 동국제약 주식회사 ,  한국과학기술연구원

Inventor： 정봉현 ,  최의성 ,  손정훈 ,  윤덕중 ,  김명국 ,  이해돈 ,  이상기

IPC: C07K1/22 ,  C07K1/14

Abstract: 본 발명은 히루딘을 히루딘을 정제하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 조(粗) 히루딘액을 금속 이온으로서 구리이온을 사용하고 용리액으로서 인산염 완충액을 사용하는 금속이온 친화성 크로마토그래피를 이용하여 정제함을 특징으로 한다. 본 발명의 방법에 의하면 종래의 히루딘의 정제방법에 비해 저렴하고 간단하게 히루딘을 고순도로 정제할 수 있는 장점이 있다.

公开(公告)号：KR1019960007776A

公开(公告)日：1996-03-22

申请号：KR1019940019637

申请日：1994-08-09

Applicant: 주식회사 녹십자홀딩스 ,  한국과학기술연구원

Inventor： 김희철 ,  오용익 ,  이상기 ,  최의성 ,  손정훈

IPC: C12N15/19

公开(公告)号：KR1020020041711A

公开(公告)日：2002-06-03

申请号：KR1020000071399

申请日：2000-11-28

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 고훈영 ,  조용서 ,  최경일 ,  배애님 ,  강경호 ,  이희윤 ,  손정훈 ,  공재양 ,  정대영

IPC: C07D401/04

Abstract: PURPOSE: A 4-aminopiperidine analogue and a producing method thereof are provided, therefore the compound can be useful as a ligand of a muscarine receptor, and it is thus used in study on Alzheimer disease. CONSTITUTION: The 4-aminopiperidine analogue is represented by formula(I), wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6 and R7 are hydrogen, cycloalkyl having carbon number of 1 to 6, alkoxy, halogen, hydroxy, hydroxymethyl, aryl, heteroaryl, amino, alkylamino, alkenyl, carbonyl or hetero ring having carbon number of 5 to 7 wherein aryl is a ring having 6 atoms, two rings having 10 atoms or a stable resonance form having double bond to adjacent carbon; heteroaryl is a single ring aromatic group having carbon number of 5 to 6 or a double ring aromatic group having carbon number of 10 in which the heteroaryl has at least one hetero atom of N, O or S; hetero ring consists of 5 to 7 atoms having 1 to 3 of N, O or S; X is carbon or sulfur; and n is an integer of 1 to 2 wherein n is 1 when X is carbon and is 2 when X is sulfur. The 4-aminopiperidine analogue is produced by reacting piperidine or amine(II) with piperazine with ketone(III) in the presence of 1 to 3 equivalent of acetic acid, 2 to 10 equivalent of reducing agent and solvent at room temperature for 3 to 24 hours to produce 4-aminopiperidine(I) and adding NaHCO3 solution and organic solvent to 4-aminopiperidine(I); and drying the extracted 4-aminopiperidine(I), dissolving it, adding 1 to 10 equivalent of hydrogen chloride to the solution, and separating, washing and drying the hydrochloride of 4-aminopiperidine.

Abstract translation: 目的：提供4-氨基哌啶类似物及其制备方法，因此该化合物可用作毒蕈碱受体的配体，因此用于阿尔茨海默病的研究。 构成：4-氨基哌啶类似物由式（I）表示，其中R 1，R 2，R 3，R 4，R 5，R 6和R 7为氢，碳数为1至6的环烷基，烷氧基，卤素，羟基，羟甲基，芳基 碳原子数为5〜7的杂芳基，氨基，烷基氨基，烯基，羰基或杂环，其中芳基为6原子的环，2个环为10个原子或具有与相邻碳原子双键的稳定共振形式; 杂芳基是碳数为5至6的单环芳基或碳数为10的双环芳基，其中杂芳基具有至少一个杂原子为N，O或S; 杂环由5至7个具有1至3个N，O或S的原子组成; X是碳或硫; n为1〜2的整数，X为碳时n为1，X为硫时为2。 4-氨基哌啶类似物通过哌啶或胺（II）与哌嗪与酮（III）在1至3当量的乙酸，2至10当量的还原剂和溶剂的存在下在室温下反应3至24 小时以产生4-氨基哌啶（I）并将NaHCO 3溶液和有机溶剂加入到4-氨基哌啶（I）中; 并将提取的4-氨基哌啶（I）干燥，溶解，向溶液中加入1〜10当量的氯化氢，分离，洗涤和干燥4-氨基哌啶的盐酸盐。

公开(公告)号：KR100295909B1

公开(公告)日：2001-10-22

申请号：KR1019940019637

申请日：1994-08-09

Applicant: 주식회사 녹십자홀딩스 ,  한국과학기술연구원

Inventor： 김희철 ,  오용익 ,  이상기 ,  최의성 ,  손정훈

IPC: C12N15/19

Abstract: PURPOSE: Provided are a vector including human epidermal growth factor(EGF) which promotes the growth of human epidermal cells and inhibits the secretion of gastric acid and a manufacturing method of EGF by using the vector. CONSTITUTION: The vector including EGF is manufactured by the steps of: inserting T-mox(MOX terminator) into a recognition site of pUC19 vector to prepare pUC-Tmox vector; inserting LEU2 gene into a recognition site of pUC-Tmox to prepare pUC-TaLE vector; inserting P-mox gene(MOX promotor), alpha pre-proleader(ppL) sequence and EGF gene into a recognition site of SalI of pUC-TaLE vector; cutting pU-EGF2 vector with EcoRI restriction enzyme; and inserting a fragment including P-mox/ppL/hEGF/T-mox into a recognition site of EcoRI of aP3 vector.

公开(公告)号：KR100288889B1

公开(公告)日：2001-05-02

申请号：KR1019980033190

申请日：1998-08-17

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  제이더블유중외제약 주식회사

Inventor： 이상기 ,  강현아 ,  최의성 ,  손정훈 ,  홍원경 ,  오달균 ,  최근범 ,  김영환

IPC: C12N15/14 ,  C07K14/765 ,  C12N5/10 ,  C12N15/63

Abstract: 본 발명은 효모 한세눌라 폴리모르파 DL-1 유래의 MOX 프로모터와 알부민 자체의 분비 시그날을 포함하는 알부민 cDNA를 이용하여 발현벡터를 조립하고, 이를 효모 한세눌라 폴리모르파에 도입하여 조립된 발현벡터가 염색체에 삽입(integration)된 형질 전환 효모를 선별, 발효 배양시켜 인간 혈청 알부민을 고효율로 발현시킴을 특징으로 하는 인간 혈청 알부민의 제조 방법, 발현 벡터 및 형질전환 효모에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR1020000014005A

公开(公告)日：2000-03-06

申请号：KR1019980033190

申请日：1998-08-17

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  제이더블유중외제약 주식회사

Inventor： 이상기 ,  강현아 ,  최의성 ,  손정훈 ,  홍원경 ,  오달균 ,  최근범 ,  김영환

IPC: C12N15/14 ,  C07K14/765 ,  C12N5/10 ,  C12N15/63

CPC classification number: C12N15/63 ,  C07K14/765 ,  C12N5/16 ,  C12N15/81

Abstract: PURPOSE: Human serum albumin is over expressed in Hansenula polymorpha DL-1 transformed with HSA gene under the control of methanol oxidase gene promoter. CONSTITUTION: The invention is disclosed transformed yeasts Hansenula polymorpha DL-1 which has integrated HSA gene, isolated from human fetal liver cDNA library and removed 5'UTR without signal sequence, controlled by methanol oxidase gene promoter. Transformed yeast is cultured in YPM medium( 1 % of yeast extract, 2 % of Bacto peptone, and 2 % of methanol) at 37°C for 72 hrs. Methanol is supplied at every 12 hrs to keep the concentration 2 % of methanol in the medium constant after 24 hrs. The concentration of expressed HSA is 40-50 mg/l by western blotting compared with authentic standard HSA. This method also detects smaller degraded HSA proteins in the medium.

Abstract translation: 目的：在甲醇氧化酶基因启动子控制下，用HSA基因转化的汉逊酵母多形汉逊酵母DL-1中过表达人血清白蛋白。 构成：公开了本发明的转化酵母多形汉逊酵母DL-1，其具有整合的HSA基因，从人胎肝cDNA文库中分离，并除去甲氧化酶基因启动子控制的没有信号序列的5'UTR。 在YPM培养基（1％的酵母提取物，2％的Bacto蛋白胨和2％的甲醇）中，将转化的酵母在37℃培养72小时。 每12小时供应甲醇，以保持培养基中2％的甲醇浓度在24小时后恒定。 与正常的标准HSA相比，通过Western印迹，表达的HSA的浓度为40-50mg / l。 该方法还检测培养基中较小的降解的HSA蛋白。

公开(公告)号：KR100102176B1

公开(公告)日：1996-07-16

申请号：KR1019920011007

申请日：1992-06-24

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 이상기 ,  최의성 ,  손정훈 ,  이상권

IPC: C12N15/15

公开(公告)号：KR1019960001818B1

公开(公告)日：1996-02-05

申请号：KR1019920011007

申请日：1992-06-24

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 이상기 ,  최의성 ,  손정훈 ,  이상권

IPC: C12N15/15

Abstract: The hirudin expression vector pYEGa-HIR5 (KCTC 8518P) containing hirudin gene (I) consists of linked promoter GAL1-GAL10, alpha factor of yeasts (a on plasmid means alpha), peptide sequence for leu-asp-lys-arg which is hydrolyzed by KEX2 as operator endopeptidase and hirudin gene. The other plasmid pYEGa-HIR525 (KCTC 8519BP) (II) consists of GAL10 as promoter rather than GAL1-GAL10 of (I). (I) and (II) are useful for yeast expression to solve the problems which in E. coli the expressed hirudin is hydrolysed and the N-terminal methionine modified hirudin does not have the activity.

Abstract translation: 含有水蛭素基因（I）的水蛭素表达载体pYEGa-HIR5（KCTC 8518P）由连接的启动子GAL1-GAL10，酵母的α因子（a在质粒表示α）组成，leu-asp-lys-arg的肽序列被水解 通过KEX2作为操作者内肽酶和水蛭素基因。 另一个质粒pYEGa-HIR525（KCTC 8519BP）（II）由GAL10作为启动子而不是（I）的GAL1-GAL10组成。 （I）和（II）可用于酵母表达以解决在大肠杆菌中表达的水蛭素被水解并且N端甲硫氨酸修饰的水蛭素不具有活性的问题。