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公开(公告)号：CN114958914B
公开(公告)日：2023-09-26
申请号：CN202210627448.0
申请日：2022-06-06
Applicant: 新乡医学院 , 新乡医学院第一附属医院
Abstract: 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。
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公开(公告)号：CN114958914A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210627448.0
申请日：2022-06-06
Applicant: 新乡医学院 , 新乡医学院第一附属医院
Abstract: 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。
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公开(公告)号：CN117535292B
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202311439094.8
申请日：2023-11-01
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C07K16/24
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及let‑7a在CHO细胞重组蛋白表达中的应用、表达系统。本发明通过在CHO细胞重组蛋白表达系统中增加miRNA let‑7a的量提高重组蛋白表达量，并且设计试验验证在CHO细胞重组蛋白表达系统中直接转染let‑7a mimics能够提高目的蛋白，例如阿达木抗体，表达量；同时，通过试验验证，将let‑7a mimics编码核酸序列插入出发载体构建let‑7a过表达载体，将let‑7a过表达载体转染至CHO细胞重组蛋白表达系统，增加miRNA let‑7a的量，更高效提高目的蛋白表达量。
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公开(公告)号：CN119876267A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202510105426.1
申请日：2025-01-23
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及提高重组蛋白表达水平的方法、基因工程细胞、试剂盒、表达系统。本发明筛选验证miR‑21‑5p可以作为哺乳动物细胞（具体为CHO细胞）的基因工程改造靶点，构建miR‑21‑5p过表达的重组蛋白稳定表达系统，可以提高重组蛋白表达量；进一步的，本发明创造性的将miR‑21‑5p和miR‑92a‑3p联合作为基因工程改造靶点，通过构建miR‑21‑5p过表达、miR‑92a‑3p表达抑制的重组蛋白稳定表达系统，相比单靶点构建的表达系统，能够更进一步提高重组蛋白表达量。
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公开(公告)号：CN119685263A
公开(公告)日：2025-03-25
申请号：CN202411890679.6
申请日：2024-12-20
Applicant: 新乡医学院 , 亚都医疗科技(河南)有限公司
Abstract: 本发明涉及一种表达DspB蛋白的重组细胞及其应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了一种表达DspB蛋白的重组细胞，所述重组细胞包含DspB蛋白基因以及宿主菌；所述宿主细胞为CHO细胞；所述DspB蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建重组细胞的方法简单，并且构建得到的重组细胞能够稳定大量表达DspB蛋白，表达的DspB蛋白的酶活性相比于原核细胞表达的DspB蛋白的酶活性更高，去除细菌生物膜的效果更好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117586351A
公开(公告)日：2024-02-23
申请号：CN202311625165.3
申请日：2023-11-30
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司 , 新乡学院
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及稳定子、融合蛋白、表达载体、表达系统、及其应用。本发明提供的稳定子，具有特定的氨基酸序列结构，通过融合在目的蛋白C末端的方式与目的蛋白融合表达，一方面能够实现目的蛋白稳定表达水平，另一方面能够提高目的蛋白稳定性，使得目的蛋白能够抵抗蛋白酶水解。
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公开(公告)号：CN116162623A
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202211267220.1
申请日：2022-10-17
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C07K16/24
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及敲低Setdb1基因表达的CHO细胞系、构建方法、应用、重组蛋白表达系统。本发明构建含有SSR重组酶元件的Setdb1基因的shRNA转座子载体；利用SSR重组酶将shRNA转座子载体载入CHO细胞，实现shRNA片段的细胞稳转效果；同时由于SSR重组酶整合效率极高，shRNA片段在目的细胞基因组整合的高拷贝数显著提升了shRNA片段的表达效果，增强了基因的干扰效果。本发明构建的CHO细胞系能够显著降低Setdb1 mRNA和蛋白表达水平，敲低作用十分明显；能够显著提高重组蛋白表达，有效克服了目前CHO细胞表达系统存在的表达水平较低的问题。
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公开(公告)号：CN106544362A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201611111154.3
申请日：2016-12-06
Applicant: 新乡医学院
CPC classification number: C12N15/85 , C12N15/66 , C12N2800/107 , C12N2830/40
Abstract: 本发明公开了一种基于cHS4元件的哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。鸡超敏感位点4(cHS4)是一种经典绝缘子元件，具有増强子阻断与异染色质屏障的功能，能将转基因沉默的主要原因-位置效应降到最低，还能降低外源启动子及增强子造成邻近基因异常表达的概率。本发明将cHS4序列引入载体的多克隆位点即eGFP下游处，一方面能克服转基因沉默，另一方面还能介导外源基因在无选择压力的情况下在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达，且安全性较好。
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公开(公告)号：CN106497973A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201611019369.2
申请日：2016-11-18
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/85
CPC classification number: C12N15/85 , C12N2800/107
Abstract: 本发明公开了一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。该附着体表达载体上插入有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的分段β-干扰素MAR序列(或者与该序列95％以上同源的核苷酸序列)，相较包含全长MAR序列或387bp MAR序列的表达载体，该载体能高效、持续、稳定地表达外源目的基因，尤其是包含E段MAR序列的载体表达最佳，可用于基因治疗。在该载体中，分段MAR序列插入载体的多克隆位点也即eGFP下游处，一方面能克服转基因沉默，另一方面能提高目的蛋白的表达水平以及后续单克隆细胞株筛选的有效性。
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公开(公告)号：CN114214359B
公开(公告)日：2025-01-21
申请号：CN202111361923.6
申请日：2021-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法。包括以下步骤：（1）将目的基因重组载体与含细胞周期调控相关基因p18和/或调控细胞生长的基因aFGF的共转基因重组载体共转染CHO细胞；所述基因p18的序列如SEQ ID NO:1所示；所述基因aFGF的序列如SEQ ID NO:2所示；（2）将共转基因重组载体和目的基因重组载体共转染到CHO细胞中后，培养并筛选，得到CHO细胞表达系统；（3）将瞬时和稳定转染CHO细胞株进行悬浮无血清培养，得到目的蛋白。本发明方法可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的瞬时和稳定高水平表达。
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