Abstract:
The present invention relates to a knock-in vector that can target a complement regulatory protein (decay accelerating factor, DAF) gene and a human alpha 1,2-fucosyltransferase (HT) gene in a position of an alpha 1,3-galactosyl transferase (alpha 1,3-GT) gene, a cell transduced with the vector, a fertilized egg that is nuclear transplanted in the cell, a transgenic animal that is knocked out by the vector, and a method for producing the same. The knock-in vector of the present invention can be used to produce a transgenic animal in which hyperacute rejection that occurs in xeno-transplantation is controlled, so that the knock-in vector can be widely used for the production of a transgenic animal that can be used for effective xeno-transplantation.
Abstract:
알파 1,3-갈락토실트랜스퍼라아제(α1,3-galactosyl transferase, α1,3-GT) 유전자의 위치에 보체 조절 단백질(decay accelerating factor, DAF) 유전자와 인간의 알파 1,2-푸코실트랜스퍼라아제(human α1,2-fucosyltransferase, HT) 유전자를 적중시킬 수 있는 넉인 벡터, 상기 벡터가 도입된 세포, 상기 세포로 핵이식된 수정란, 상기 벡터에 의해 넉 아웃된 형질전환 동물, 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 넉인 벡터는 이종장기이식에서 발생하는 초급성 거부반응이 억제된 형질전환 동물의 제조에 이용될 수 있으므로, 보다 효율적인 이종장기이식에 사용될 수 있는 형질전환 동물의 생산에 널리 활용될 수 있을 것이다.
Abstract:
본 발명은 단백질 과발현 카세트가 넉인된 유전자 적중 벡터 제조 방법 및 이 벡터가 도입된 이종간 이식용 형질전환 복제동물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 사용 목적에 따라 프로모터의 선택이 가능하여 과발현시키기 위한 유전자의 발현 조절이 가능하며, 알파 1,3-갈락토실트랜스퍼라제 유전자를 효과적으로 넉아웃시킴과 동시에 사람 CD46(MCP) 과발현 카세트가 상기 선택된 프로모터에 의해 과발현되도록 넉인됨으로써, 이식거부반응이 억제된 형질전환 복제 미니어쳐 복제 돼지를 생산할 수 있으며, 이들 및 이들의 자손을 이용하여 이종간 세포와 장기의 이식에 널리 사용할 수 있는 장점이 있다.
Abstract:
PURPOSE: A gene targeting knock-in vector including protein over-revelation cassette, a manufacturing method thereof, and a transformation cloned animal for heterograft in which the vector is introduced are provided to manufacture a transformation reproduction miniature reproduction pig in which a graft rejection is controlled by effectively knock-out and knock-in at the same time. CONSTITUTION: A gene targeting knock-in vector successively including protein over-revelation cassette comprises a first area having base sequences which are homologous in gene of mammal, a cassette for protein over-revelation, and a second area having homologous base sequences in gene of mamma. The gene of mammal is alpha 1,3- galactosyltransferase gene. The mammal is a pig. The pig is a NH-miniature pig. The first area is a left arm including a part of intron 8 of the alpha 1,3- galactosyltransferase or Exxon 9. A size of the first area is 2kb~6kb.
Abstract:
The present invention provides a knock-in vector for producing a therapeutic protein comprises a 5′ end fragment containing 5176 bp promoter, exon 1, and 2 of bovine beta-casein genome DNA composed of polynucleotides having nucleic acid sequences of sequence number 1, as 5′ arm; a gene encoding the therapeutic protein; and exon 3 and 4 of bovine beta-casein genome DNA composed of polynucleotides having nucleic acid sequences written by sequence number 2, as 3′ arm.
Abstract:
본 발명은 돼지 베타-카제인(porcine β-casein genomic DNA)을 이용한 넉-인(knock-in)벡터로 생리활성물질(human basic FGF, hFGF)을 생산하기 위한 돼지 체세포의 생산 및 생리활성 물질의 생산 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 첫째, 돼지 베타-카제인 유전자 타겟팅 넉-인 벡터로 돼지의 체세포를 형질전환시키는 단계; 둘째, 돼지의 체세포를 배양하여 상동재조합을 유도하는 단계; 셋째, 상동재조합에 의해 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 선별하는 단계: 넷째, 돼지 난자의 핵을 제거하고 유전자 타겟팅된 세포를 도입하여 체세포 핵이식된 수정란을 제조하는 단계; 및 다섯째, 상기 수정란을 착상시키는 단계를 포함하는 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 제조하는 방법을 제공하기 위한 것이다. 본 발명은 상기 방법으로 제조된 hFGF 발현 형질전환 돼지는 유선 특이적으로 사람 생리활성물질을 발현하며, 기존의 방법에 비해 매우 높은 농도로 유즙 중에 사람 생리활성물질을 발현하며 또한, 본 발명의 형질전환된 돼지로부터 생산된 hFGF 단백질은 시판되는 동종 단백질이 나타내는 것 이상의 안정성 및 우수한 생리활성을 나타내며, 기존의 hFGF 보다 우수한 생리활성을 갖는 hFGF 단백질을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다. 돼지 베타-카제인, 상동유전자 재조합, 넉-인, human basic FGF(hFGF)
Abstract translation:本发明提供了用于产生转基因牛外部蛋白质的敲入载体。 所述敲入载体包含基因构建体,并且所述基因构建体包含:i)包含具有由SEQ ID NO:1表示的核酸序列的多核苷酸的5'-臂,其包含β-内含子6和外显子7的一部分 牛基因组DNA编码区; ii)用于编码与对应于框架的β-酪蛋白编码区域连接的治疗性蛋白质的多核苷酸; 和iii)包含具有由SEQ ID NO:2表示的核酸序列的多核苷酸的3'-臂,其包含在牛基因组DNA的β-酪蛋白编码区中具有含有外显子8和外显子9的片段的基因构建体。