公开(公告)号：CN117187216B

公开(公告)日：2025-04-08

申请号：CN202311263540.4

申请日：2023-09-27

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 赵林果 ,  李琦 ,  张珊珊 ,  张洋洋 ,  王振中 ,  王小宇 ,  刘栋

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12P19/60

Abstract: 本发明公开了一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明从Dictyoglomus thermophilum DSM 3960基因组中克隆得到一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，与现有技术相比，本发明所提供的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha具有优良的耐热性能，对耐热的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha进行耐糖关键位点突变，获得的新型α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha耐糖突变体，其耐糖系数提高了2.3倍以上，该突变体能够特异性水解淫羊藿苷的R2位上通过α‑1糖苷键连接的鼠李糖，能够利用突变体高效转化淫羊藿苷生成淫羊藿次苷I。

公开(公告)号：CN117187216A

公开(公告)日：2023-12-08

申请号：CN202311263540.4

申请日：2023-09-27

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 赵林果 ,  李琦 ,  张珊珊 ,  张洋洋 ,  王振中 ,  王小宇 ,  刘栋

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12P19/60

Abstract: 本发明公开了一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶及其耐糖突变体和应用，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明从Dictyoglomus thermophilum DSM 3960基因组中克隆得到一种耐热α‑L‑鼠李糖苷酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，与现有技术相比，本发明所提供的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha具有优良的耐热性能，对耐热的α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha进行耐糖关键位点突变，获得的新型α‑L‑鼠李糖苷酶DthRha耐糖突变体，其耐糖系数提高了2.3倍以上，该突变体能够特异性水解淫羊藿苷的R2位上通过α‑1糖苷键连接的鼠李糖，能够利用突变体高效转化淫羊藿苷生成淫羊藿次苷I。

公开(公告)号：CN116855488A

公开(公告)日：2023-10-10

申请号：CN202310677975.7

申请日：2023-06-08

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 张志洁 ,  吴懿 ,  刘栋 ,  卢姗 ,  朱文慧 ,  王小宇

IPC: C12N11/14 ,  C12N15/70 ,  C07K19/00 ,  C12N9/42 ,  C12P19/60 ,  C12P19/14

Abstract: 一种固定化β‑D‑葡萄糖苷酶的制备方法及其在转化淫羊藿黄酮中的应用，步骤为(1)融合β‑D‑葡萄糖苷酶4LP‑Tpebg13的构建；(2)4LP‑Tpebg13的纯化；(3)沸石活化；(4)4LP‑Tpebg13的固定化；(5)4LP‑Tpebg13的特异性吸附；(6)固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y转化淫羊藿黄酮中的应用。本发明利用Na‑Y沸石为固定化载体，加入融合β‑D‑葡萄糖苷酶4LP‑Tpebg13，构建固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y，其酶活回收率为53.2％，连接肽的引入使蛋白负载量提高了40.0％。含有连接肽的固定化酶4LP‑Tpebg13@Na‑Y具备更好的结合稳定性、底物亲和力和催化效率。4LP‑Tpebg13@Na‑Y转化淫羊藿黄酮的最适条件为：底物淫羊藿苷浓度为1.4mM，酶用量0.5U/mL，pH 5.0，80℃、反应时间1h，摩尔转化率高达95.7％。连接肽提高了固定化酶的稳定性和重复利用性，重复使用10次后，4LP‑Tpebg13@Na‑Y保留77.1％催化活性，比Tpebg13@Na‑Y高40.9％。