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公开(公告)号：CN109628433A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201910004470.8
申请日：2019-01-03
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N9/44 , C12N15/56 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N15/81 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12P19/16 , C12R1/19 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了一种具有高分泌能力的普鲁兰酶及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的普鲁兰酶胞外分泌能力高，将携带本发明普鲁兰酶的大肠杆菌摇瓶发酵48h，可使发酵液中的总酶活力达212.0U·mL‑1，其中，胞外酶活达200.5U·mL‑1，占了总酶活力的94.5％，因此，本发明的普鲁兰酶容易发酵制备，可以显著降低发酵工艺控制难度及成本；本发明的普鲁兰酶作用条件温和，能够在温度40～60℃，pH 6.0～7.5的条件下水解淀粉中的α‑1,6‑葡萄糖苷键，因此，本发明的普鲁兰酶在工业转化中能够降低成本，在食品、淀粉糖等行业中具有潜在利用价值。
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公开(公告)号：CN115851568B
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202211581907.2
申请日：2022-12-09
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种高产普鲁兰酶的重组需钠弧菌，所述重组需钠弧菌由重组质粒OmpA‑PulA导入宿主需钠弧菌得到，所述重组质粒OmpA‑PulA由普鲁兰酶的编码基因和OmpA的信号肽编码基因与表达载体连接构建而成。本发明还公开了一种利用所述重组需钠弧菌高效发酵生产鲁兰酶的方法。本发明首次实现了普鲁兰酶PulA在需钠弧菌中的分泌表达，并且利用本发明的发酵方法生产普鲁兰酶PulA，胞外酶活高达83.3U·mL‑1，是大肠杆菌中酶活7.3U·mL‑1的11.4倍，活力提高显著。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110343687B
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN201910650235.8
申请日：2019-07-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有高分泌能力的普鲁兰酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明普鲁兰酶突变体胞外分泌能力较野生型有了明显的提高，将携带编码本发明普鲁兰酶突变体PulBd‑306的基因的大肠杆菌摇瓶诱导发酵44h，即可使发酵液上清液中的胞外酶活达38.9U·mL‑1，是野生型的2.3倍；将携带编码本发明普鲁兰酶突变体PulBd‑117的基因的大肠杆菌摇瓶诱导发酵44h，即可使发酵液上清液中的胞外酶活达49.6U·mL‑1，是野生型的2.9倍。
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公开(公告)号：CN110343687A
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201910650235.8
申请日：2019-07-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种具有高分泌能力的普鲁兰酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明普鲁兰酶突变体胞外分泌能力较野生型有了明显的提高，将携带编码本发明普鲁兰酶突变体PulBd-306的基因的大肠杆菌摇瓶诱导发酵44h，即可使发酵液上清液中的胞外酶活达38.9U·mL-1，是野生型的2.3倍；将携带编码本发明普鲁兰酶突变体PulBd-117的基因的大肠杆菌摇瓶诱导发酵44h，即可使发酵液上清液中的胞外酶活达49.6U·mL-1，是野生型的2.9倍。
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公开(公告)号：CN108642125A
公开(公告)日：2018-10-12
申请号：CN201810441370.7
申请日：2018-05-10
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于微孔板的肌醇定量检测方法，属于微生物检测领域。本发明包括以下步骤：A.将检测用菌复苏复苏菌种；B.将复苏斜面菌种利用0.9％的无菌生理盐水洗下，离心收集细胞再用0.9％的无菌盐水悬浮细胞，震荡混匀制备成菌基液；C.选取适量的菌基液利用0.9％的无菌盐水进行稀释，控制菌悬液浓度的吸光值在0.1～0.3之间，即为接种菌悬液；D.将肌醇标准溶液或待检测的样品溶液和无菌水按照一定比例加入微孔板中，再补充肌醇测定培养基；E.将接种菌悬液接种至微孔板中，并置于高速震荡摇床中，震荡培养14～17h；F.培养结束后利用酶标仪测定微孔板中菌液吸光值，绘制肌醇标准曲线并计算样品中的肌醇含量。本发明具有成本低、操作简单、检测时间短和通量大等特点。
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公开(公告)号：CN108467858A
公开(公告)日：2018-08-31
申请号：CN201810110773.3
申请日：2018-02-05
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种α-L-鼠李糖苷酶及其应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次克隆并重组表达能特异性降解α-1,2糖苷键的α-L-鼠李糖苷酶BtRha，弥补了α-L-鼠李糖苷酶水解鼠李糖与鼠李糖之间的α-1,2糖苷键的空白；该酶能高效特异性降解朝霍定C转化为淫羊藿苷，在酶用量1.5 U/mL，pH 5.5，55℃的条件下水解1 g/L的朝霍定C 90 min,摩尔转化率高达90.5%以上。
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公开(公告)号：CN107760623A
公开(公告)日：2018-03-06
申请号：CN201711081504.0
申请日：2017-11-07
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N1/20 , C12N9/26 , A23L33/135 , A23K10/16 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了一株产中性生淀粉酶的阿氏芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。所述高产中性生淀粉酶的野生芽孢杆菌菌株筛选自广西木薯田浅层土壤。本发明所述菌株保藏在湖北省武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC M 2017320。该菌株培养条件简便，发酵周期短,酶活力高；所产生淀粉酶为中温、中性酶，最适温度和最适pH分布为50℃和7.0，水解生淀粉能力强，产物以麦芽糖为主。在淀粉糖、发酵、食品和饲料等工业领域具有广阔的应用前景。
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