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公开(公告)号：CN115960175A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202210946281.4
申请日：2022-08-08
Applicant: 江南大学 , 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母及其构方法与应用。本发明首先筛选了常用的信号肽，然后将不同的信号肽进行整合，构建杂合型信号肽，使乳铁蛋白能够在细胞器中快速传递，促进乳铁蛋白的分泌。本发明通过不同信号肽之间的组合，能够有效的提高乳铁蛋白的表达量，并通过westernblot发现乳铁蛋白的表达量增加了约5倍，高达98mg/L。
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公开(公告)号：CN115851801A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211514262.0
申请日：2022-11-29
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌基因组编辑方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌作为表达宿主，将单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白整合至枯草芽孢杆菌基因组中，得到重组枯草芽孢杆菌，其中，单链DNA结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，DNA退火蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。通过在枯草芽孢杆菌基因组中整合表达单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白，可将枯草芽孢杆菌基因组整合同源臂长度缩短至35bp，为枯草芽孢杆菌内实现高效简易的基因编辑提供了工具。
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公开(公告)号：CN115851468A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202210842628.0
申请日：2022-07-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种生产人酪蛋白巨肽的重组毕赤酵母及其应用，在毕赤酵母菌株中高拷贝表达人酪蛋白巨肽基因，实现人酪蛋白巨肽的分泌表达。本发明通过构建的重组毕赤酵母生产的产物中，杂蛋白含量低，便于后续纯化，摇瓶产量即高达234mg/L，该过程无需融合表达，且发酵上清液杂蛋白少，目的蛋白的分泌表达量占毕赤酵母总分泌蛋白的93％，这为毕赤酵母代谢工程高效生产母乳蛋白奠定了基础。
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公开(公告)号：CN115786335A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202210955743.9
申请日：2022-08-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于多种典型模式微生物的高强度启动子，本发明是以P43启动子为基础，通过随机突变和高通量筛选获得了7个高强度启动子序列(PM1～PM7)，并在多种典型模式微生物中使用质粒中进行游离表达，证明了其有效性和通用性。
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公开(公告)号：CN115710557A
公开(公告)日：2023-02-24
申请号：CN202210820746.1
申请日：2022-07-13
Applicant: 江南大学 , 鄂尔多斯市中轩生化股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种生产D‑柠檬烯的重组酵母菌株及其构建方法，本发明在前期构建的菌株MKL8的基础上继续优化前体乙酰辅酶A和NADPH辅因子水平，为胞内柠檬烯合成创造了较优条件，并增加胞内柠檬烯合酶拷贝数由2个至8个，摇瓶发酵实现产量由原来的657mg/L，提升至1248mg/L，比原产量提高1.90倍。再运用区室化工程将柠檬烯合成全途径酶定位至线粒体，实现重组酿酒酵母菌株柠檬烯在线粒体内的同步高效合成。综合运用细胞质与线粒体双重调控使柠檬烯的产量得到进一步的提升至1392mg/L，最终实现柠檬烯在酿酒酵母中的高效合成，重组酵母菌株相对于原菌株具有较好的生长速率，具有较大的应用推广价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114806906B
公开(公告)日：2023-02-21
申请号：CN202210609797.X
申请日：2022-05-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株产中性乳糖酶的乳酸克鲁维酵母，属于生物工程技术和酶工程领域。本发明提供的乳酸克鲁维酵母JNXR‑2101已于2021年12月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211628。该菌株胞外中性乳糖酶酶活可达10.22U/mL，摇瓶发酵优化后胞内酶活可达83.36U/mL，5L发酵罐中分批补料优化后，其总酶活可达220‑250U/mL。本发明的乳酸克鲁维酵母JNXR‑2101所产的乳糖酶符合国家食品安全标准和食品添加剂标准，安全性较高。
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公开(公告)号：CN113913400B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202111420059.2
申请日：2021-11-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了催化活性提高的L‑山梨酮脱氢酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨酮脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了酶活提升的L‑山梨酮脱氢酶突变体M167L、S453A、L460V、E471D和M167L‑S453A‑E471D，使突变体的比酶活达4.20U/mg、1.67U/mg、3.00U/mg、1.73U/mg、2.82U/mg，与野生酶相比提高了1.1～2.6倍，有助于实现L‑山梨酮脱氢酶参与的代谢途径相关产物产量的提高。
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公开(公告)号：CN112375724B
公开(公告)日：2022-12-16
申请号：CN202011298679.9
申请日：2020-11-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成α‑熊果苷的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明利用表达蔗糖磷酸化酶(SmSP)的重组枯草芽孢杆菌全细胞催化高效生产α‑熊果苷，为α‑熊果苷的生产提供了新的思路和方法。本发明通过分子对接以及定点饱和突变筛选到了SmSP酶活提高的蛋白突变体SmSPI336L，通过增加SmSPI336L在基因组上的拷贝数的方式，提高了SmSP的蛋白表达量，并通过优化BS‑3SmSPI336L菌株的催化条件，大幅提高了α‑熊果苷的产量。当底物HQ的浓度为50g/L，蔗糖浓度为310.9g/L，菌体浓度OD600＝40，催化体系在摇瓶中30℃、220rpm催化20h时α‑熊果苷的产量达到115.8g/L，底物HQ的摩尔转化率为93.6％。
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公开(公告)号：CN113155804B
公开(公告)日：2022-11-15
申请号：CN202110585941.6
申请日：2021-05-27
Applicant: 江南大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种快速检测氨基葡萄糖的方法。本发明的方法包括配制N‑乙酰氨基葡萄糖溶液，在溶液中加入没食子蓝，得到没食子蓝检测试剂；向含有氨基葡萄糖生产菌株的发酵液中加入没食子蓝检测试剂，培养后检测荧光强度，根据荧光强度降低判断氨基葡萄糖含量。本发明快速检测氨基葡萄糖的方法，主要应用于测量发酵液中，可将底物N‑乙酰氨基葡萄糖转化为氨基葡萄糖的己丁二糖脱乙酰酶的总催化活性。与现有的邻苯二甲醛检测方法不同，本发明的检测方法仅需一步添加试剂混合操作，培养后即可由酶标仪进行检测。相较于现有方法，本方法简单高效，可以明显提升实验效率。
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公开(公告)号：CN113322249B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN202110638708.X
申请日：2021-06-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于明胶水凝胶的几丁二糖脱乙酰酶固定化方法，包括如下步骤：向含有几丁二糖脱乙酰酶的酶液中加入明胶，并加热使明胶溶解；加入京尼平，并按体积比1:0.8～1.2加入含有表面活性剂的氟化液，振荡混匀后冷却，并摇晃培养0.5～2天；按体积比，加入5～15％的1H,1H,2H,2H‑全氟辛醇，并加入缓冲液，水油分层后取水相，静置后获得第一水凝胶；第一水凝胶经清洗后，加入缓冲液，并加入京尼平，摇晃培养1～5天，得到第二水凝胶，即为固定化几丁二糖脱乙酰酶。本发明采用两步成胶的方式，制备得到的固定化几丁二糖脱乙酰酶，具有较好的耐高温性能，可以耐受80℃高温处理，对提升酶的催化活性具有显著帮助，并且稳定性较好，重复使用8次后，水凝胶催化活性无明显变化。
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