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公开(公告)号：CN107099562A
公开(公告)日：2017-08-29
申请号：CN201710498577.3
申请日：2017-06-27
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: Y02P20/588 , C12P13/06 , C12N9/16 , C12N11/02 , C12Y301/04004
Abstract: 本发明公开了一种利用固定化磷脂酶D生产磷脂酰丝氨酸的方法，配制表面活性剂水溶液，室温下，边搅拌边滴加游离酶水溶液至澄清，得混合液；将混合液滴加至金属离子盐溶液中，室温下搅拌反应0.5h‑2h后得固定化的酶溶液；离心，干燥得到固定化的磷脂酶催化剂；将溶于有机相中的卵磷脂、丝氨酸溶液与固定化酶进行转化反应，温度 0‑40℃，时间1‑24 小时。本发明利用固定化的磷脂酶D生产的磷脂酰丝氨酸浓度是游离酶的5‑10倍，大大降低了两相界面的传质阻力，增大了酶与底物的接触面积，缩短了反应时间，而且固定化后的磷脂酶可重复利用，适应于规模化生产。
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公开(公告)号：CN106479993A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201610849843.8
申请日：2016-09-26
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12N9/16 , C12P13/00 , C12Y301/04004
Abstract: 本发明公开一种磷脂酶D催化磷脂酰胆碱PC）合成磷脂酰乙醇胺（PE）的方法。本发明包括磷脂酶D的制备及产酶条件优化，催化体系的建立，本发明可以实现磷脂酰乙醇胺（PE）的高效合成。添加底物磷脂酰胆碱（PC）和乙醇胺，通过两相催化得到磷脂酰乙醇胺和胆碱。本发明使用易得的底物卵磷脂，工艺简单，反应条件温和，磷脂酰乙醇胺（PE）的转化率可达到69.7%。
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公开(公告)号：CN106148429A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610720526.6
申请日：2016-08-25
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物转化纤维素水解液生产D‑1,2,4‑丁三醇的方法。该方法为构建克隆表达2‑酮酸脱羧酶和D‑木糖脱氢酶，木糖酸脱水酶和醇脱氢酶的基因，并将构建好的基因转入敲除木糖异构酶的宿主菌的细胞内得基因工程菌，培养基因工程菌并接种至纤维素水解液中发酵生产D‑1,2,4‑丁三醇。本发明方法简单易行，产量高，适合产业化。
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公开(公告)号：CN119955835A
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202510427440.3
申请日：2025-04-07
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用基因MESH1提高甲醇同化及乙酸、丁酸合成的方法。将果蝇来源(p)ppGpp基因MESH1重构于嗜甲基丁酸杆菌内，并通过突变嗜甲基丁酸杆菌中强启动子（pth1)干扰嗜甲基丁酸杆菌中(p)ppGpp含量。不同启动子强度导致表达效果不同，其中启动子Pth13的表达效果最好。本发明利用启动子Pth1调控MESH1的表达时重组B.methylotrophicum的甲醇利用性有所提升，较原始菌株的甲醇同化量提高了1.4%，乙酸产量提高了22.23%，丁酸产量提高了14.54%。同时将重构菌株进行启动子发酵优化，发现利用启动子Pth13调控MESH1的表达时重组B.methylotrophicum的甲醇利用性能达到最优值，较原始菌株的比生长速率增加了1.38倍，甲醇同化量提高了25.2%，同时乙酸产量和丁酸产量较对照组分别增加了32.7%和34.38%，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN119432698A
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202411613883.3
申请日：2024-11-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组菌株NT1003△ycjQ‑LS01及其构建方法与在产1,5戊二醇上的应用。筛选合成1,5戊二醇路径上的关键酶，并将赖氨酸脱羧酶CadA，转氨酶PatA，胺氧化酶ECAO，醛还原酶YahK这四种酶组成新的路径，最后将携带有这四种酶的质粒导入敲除醇降解基因ycjQ的菌株NT1003上，得到高产1,5戊二醇的菌株NT1003△ycjQ‑LS01。重组菌株NT1003△ycjQ‑LS01以Lys为底物时，合成路径减少辅因子（只需2个NADPH）和简化了生产路径（生产路径仅4步），避免了引入过多的基因引起的代谢负担；此外该菌株敲除了醇降解基因ycjQ，能够大大减少戊二醇的降解。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118516387A
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202410760998.9
申请日：2024-06-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生产戊二胺的重组大肠杆菌及其构建方法与发酵放大应用。本方面以产赖氨酸的大肠杆菌KA30为底盘，过表达赖氨酸脱羧酶(cadA)。为了减少诱导剂的使用成本，删除了乳糖操纵子。将所述的重组大肠杆菌在50L发酵罐以固定的比例补入葡萄糖与硫酸铵进行发酵，实现了戊二胺的高效率转化。本发明解决了目前的生产方法中戊二胺转化率不高的技术问题。
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公开(公告)号：CN118064472A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202410126419.5
申请日：2024-01-30
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用乙酸合成苯酚的重组大肠杆菌的构建方法及其应用。构建合成苯酚的代谢途径得到重组质粒pACYCDuet‑tpl；选取大肠杆菌BL21(DE)3依次敲除iclR基因，实现乙醛酸循环的加强，以增加流向目标产物的乙酰CoA代谢流；继续敲除合成酪氨酸的调控基因tyrR基因，从而解除苯酚直接前体，即酪氨酸对莽草酸途径酶的反馈抑制；再引入编码DAHP合成酶的aroG基因的反馈抗性突变体基因aroG*（Asp146Asn），以解除DAHP合成酶的反馈抑制，从而增加前体供应；最后导入重组质粒pACYCDuet‑tpl得到以乙酸为碳源发酵生产苯酚的重组大肠杆菌。本发明大肠杆菌在以乙酸为碳源的培养基中发酵生产苯酚，产量可以达到204.6 mg/L。
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公开(公告)号：CN118006650A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410208081.8
申请日：2024-02-26
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于乙酸合成戊二胺的工程菌株的构建方法与应用。以大肠杆菌KA30为底盘细胞，在胞内引入乙酸同化途径，强化草酰乙酸合成途径以及天冬氨酸合成途径，获得质粒pTrc99a‑gltA‑aceB‑MDH‑aspA‑aspC和pCWJ‑ackA‑PTA‑cadA，并一同转入到大肠杆菌KA30中获得高效利用乙酸合成戊二胺的重组菌株KA306。本发明首次构建出能够高效利用乙酸合成戊二胺的大肠杆菌KA306，在添加10 g/L乙酸钠的条件下合成了0.44 g/L戊二胺，乙酸摩尔转化率达21.9%。本发明利用非粮食基乙酸作为底物合成戊二胺，为戊二胺的生物合成提供了新思路。
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公开(公告)号：CN117844725A
公开(公告)日：2024-04-09
申请号：CN202410029523.2
申请日：2024-01-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株促进生物膜形成的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。本发明利用结晶紫染色法对大肠杆菌生物膜相关的19种基因进行筛选，得到了3种影响较大的生物膜基因：yhjH、yjcC、lsrK基因，并利用CRISPR‑Cas9系统构建了相应的单敲除yhjH、yjcC、lsrK基因重组大肠杆菌。进一步的，通过对上述重组大肠杆菌进行复筛，最终得到了一株显著促进大肠杆菌生物膜形成的重组大肠杆菌BA102‑ΔyhjH，提高了生物膜的成膜效率，改善了生物膜的性能，强化了大肠杆菌和电极界面电子传递，进而提高了MFC输出电压。
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公开(公告)号：CN113106047B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202110389433.0
申请日：2021-04-12
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组食甲基丁酸杆菌及其构建方法与应用。以食甲基丁酸杆菌为来源，构建过表达甲醇利用和丁酸合成基因工程菌，即BM/pXY1‑mtaA/mtaB/mtaC2和BM/pXY1‑atoB/paaH/crt/bcd。重组菌株对甲醇利用和丁酸合成的能力显著增强，在PB培养基中，甲醇的消耗能力分别提升了69％，14％。丁酸的产量分别提升了38％，28.6％。为进一步提高甲醇的消耗能力奠定了基础。
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