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公开(公告)号：CN112899262A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110356560.0
申请日：2021-04-01
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法，包括如下步骤：(1)向赖氨酸营养缺陷型菌株中导入含赖氨酸脱羧酶基因的质粒，得到重组工程菌；(2)将步骤(1)所得重组工程菌于含赖氨酸的培养基中培养，通过测定OD600筛选表达赖氨酸脱羧酶的重组工程菌。本发明偶联了赖氨酸营养缺陷型菌株的生长状态与赖氨酸脱羧酶的酶活，无需检测底物及产物消耗，更加快速且高效，即实现了大肠杆菌生长状态与赖氨酸脱羧酶酶活偶联，对赖氨酸脱羧酶的定向进化具有深远意义。
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公开(公告)号：CN109651087B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201910094659.0
申请日：2019-01-30
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用连续色谱技术分离丁三醇发酵液的工艺，将丁三醇发酵液经过离心和超滤处理后，得到的清液泵入装有吸附树脂的连续分离装置中进行吸附，再用低沸点的有机溶剂或者所述有机溶剂的水溶液作为解吸剂进行解吸，即可得产品丁三醇，以纯水作为再生剂进行吸附剂再生。本发明利用洗脱竞争作用，通过连续装置实现丁三醇分离纯化的目的，产品液中的丁三醇可高达2％～5％以上，纯度98％以上，平均收率99％以上，丁三醇的浓度经过色谱分离过程得到了提高，为进一步通过传统精馏法浓缩丁三醇节省了大量的能耗。
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公开(公告)号：CN109337942B
公开(公告)日：2020-10-23
申请号：CN201811365167.2
申请日：2018-11-16
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种混合发酵生产L‑哌啶甲酸的方法，以产赖氨酸的菌株和过表达赖氨酸环化脱氨酶的菌株作为发酵菌株生产L‑哌啶甲酸，其中，所述的赖氨酸环化脱氨酶核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明以葡萄糖为底物，通过两个菌株共同发酵生产L‑哌啶甲酸。
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公开(公告)号：CN106434782B
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201610895160.6
申请日：2016-10-14
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种产顺式‑4‑羟脯氨酸的方法，该方法通过在宿主菌细胞内构建过表达脯氨酸羟化酶基因Ecp4H，利用CRISPR‑Cas9技术抑制脯氨酸降解途径中脯氨酸羟化酶基因putA以及α‑酮戊二酸降解途径中琥珀酸脱氢酶基因sucA、sucB，异柠檬酸裂解酶基因aceA和异柠檬酸激酶基因aceK的表达得到重组菌株，并将重组菌株发酵培养后，全细胞转化生产顺式‑4‑羟脯氨酸。本方法培养方式简单，并且菌株活力较高，产物转化率较高。
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公开(公告)号：CN110591997A
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201911036211.X
申请日：2019-10-29
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高木糖酸脱水酶活性的基因工程菌及其构建方法与应用，构建克隆表达铁硫簇插入蛋白SufA，并将构建好的基因转入宿主菌细胞内得基因工程菌，所述基因工程菌用于发酵生产D-1,2,4-丁三醇的中间产物2-酮基-3-脱氧-d-木糖酸。通过提高了木糖酸脱水酶的活性，进而促进了木糖酸的消耗并提高了2-酮基-3-脱氧-d-木糖酸的产量，最后提高了D-1，2，4-丁三醇的发酵生产。本发明方法简单，可靠性强，应用前景广。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110157653A
公开(公告)日：2019-08-23
申请号：CN201910385341.8
申请日：2019-05-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种高产环磷酸腺苷的重组大肠杆菌及其在合成环磷酸腺苷上的应用。本发明从cAMP生产菌株中克隆得到的腺苷酸环化酶基因，重组菌经破碎后得到的粗酶液有着良好的催化活性和稳定性，加入三磷酸腺苷（ATP）以及Zn2+，反应体系简单、条件温和、周期短、副产物少，而且清洁无污染，是一条简单、快速、高效的生产途径，其对底物ATP的转化率达到90％以上。
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公开(公告)号：CN106367445B
公开(公告)日：2019-08-20
申请号：CN201610724114.X
申请日：2016-08-25
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种全细胞生物催化生产戊二酸的方法。该方法先诱导表达并收集重组菌株E.coliBL‑22AB‑YDT的细胞和E.coli28LGOX的细胞，再将重组菌E.coli28LGOX的细胞和重组菌E.coliBL‑22AB‑YDT的细胞按1：1‑5混合后加入底物L‑赖氨酸和L‑谷氨酸，使L‑谷氨酸与L‑赖氨酸的摩尔比为1：0.5‑4，加入表面活性剂，全细胞催化生产戊二酸。本发明方法无需添加2‑酮戊二酸，降低了生产成本，解决了发酵法生产周期长，代谢产物复杂，底物转化率低，产物分离提取困难，及能耗高的问题，也解决了酶法催化中级联催化过程不易实现的不足，提高催化效率，同时省了酶纯化过程。
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公开(公告)号：CN109337942A
公开(公告)日：2019-02-15
申请号：CN201811365167.2
申请日：2018-11-16
Applicant: 南京工业大学
CPC classification number: C12P17/12 , C12N9/88 , C12N15/70 , C12Y403/01028
Abstract: 本发明公开了一种混合发酵生产L-哌啶甲酸的方法，以产赖氨酸的菌株和过表达赖氨酸环化脱氨酶的菌株作为发酵菌株生产L-哌啶甲酸，其中，所述的赖氨酸环化脱氨酶核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明以葡萄糖为底物，通过两个菌株共同发酵生产L-哌啶甲酸。
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公开(公告)号：CN109295116A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811310272.6
申请日：2018-11-06
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种双细胞耦合催化生产戊二酸的方法。该方法包括以下步骤：步骤1，构建重组菌株E.coli BL-22AB和E.coli BL-YDT；步骤2，选取重组菌株E.coli BL-22AB和E.coli BL-YDT加入催化L-赖氨酸反应生产戊二酸。与现有技术相比，本发明公开了一种双细胞耦合催化生产戊二酸的方法，通过将DavAB和GabDT分开表达在两个细胞中，利用双细胞耦合催化生产的方式，使得中间产物5-氨基戊酸的积累减少，终产物戊二酸的产量提高。相比于将DavAB和GabDT共表达在一个细胞中，戊二酸的摩尔收率提高了19.2%。
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公开(公告)号：CN108559765A
公开(公告)日：2018-09-21
申请号：CN201711457587.9
申请日：2017-12-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物酶法从小龙虾壳中提取N-乙酰氨基葡萄糖与虾青素的方法。该方法包括以下步骤：小龙虾虾壳预处理得到小龙虾虾壳粉；取产几丁质酶微生物为供试菌，将供试菌接种至种子培养基上培养得种子液，再将种子液转移至发酵培养基中发酵后，提纯得粗纯酶液；取小龙虾虾壳粉置于反应釜中，依次加入粗纯酶液和有机试剂，避光下边搅拌边恒温加热至20-37℃得酶解液；将酶解液静止分层后，倒出上层液，避光下回收有机试剂和富含虾青素的虾油，再离心下层液，用吸附树脂经吸附洗脱后，将洗脱液经低温浓缩、醇洗、结晶、干燥得N-乙酰氨基葡萄糖。本发明方法以废弃生物质为原料，同时提取两种物质，缩短了产生周期，提高了产物的质量。
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