一种酮基合成酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌的构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN106676127B

    公开(公告)日:2020-01-17

    申请号:CN201710078025.7

    申请日:2017-02-14

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 何宁 李志朋

    Abstract: 本发明公开了一种酮基合成酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌的构建方法及应用,包括如下步骤:(1)以裂殖壶菌的基因组为DNA模板,用上游引物对和下游引物对分别PCR扩增KS基因的上游片段UKS和下游片段DKS;(2)将上游片段UKS和下游片段DKS与敲除载体连接,构建重组敲除质粒;(3)将上述重组敲除质粒电转化裂殖壶菌,用抗性平板筛选,并经PCR抗性基因序列验证,得转化子,即所述酮基合成酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌。本发明提供了裂殖壶菌敲除基因的工程菌的构建方法构,建了敲除FabA基因裂殖壶菌重组菌,该工程菌产多不饱和脂肪酸的能力比出发菌株中所占总油脂的比例减少了43%,而16碳和18碳饱和脂肪酸的生产量增加29%。

    一株过表达分解代谢物控制蛋白A编码基因的工程菌及其构建方法

    公开(公告)号:CN109929854A

    公开(公告)日:2019-06-25

    申请号:CN201910300784.2

    申请日:2019-04-15

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 何宁 王玲伟

    Abstract: 一株过表达分解代谢物控制蛋白A编码基因的工程菌及其构建方法。过表达分解代谢物控制蛋白A编码基因ccpA利用PCR扩增克隆多糖絮凝剂合成途径获得,核苷酸序列如SEQ ID No1。将ccpA基因片段连接到表达载体上,导入地衣芽孢杆菌中,通过四环素抗性筛选获得目的基因的一株过表达分解代谢物控制蛋白A编码基因ccpA的地衣芽孢杆菌基因工程菌。构建方法:设计PCR引物;将扩增得到的目的基因插入到PHY300PLK-PamyL-TTamyL组成型启动子PamyL下游多克隆位点得过表达质粒,导入E.coli DH5α中扩增;将过表达质粒电转化地衣芽孢杆菌,筛选转化子,经验证得地衣芽孢杆菌重组菌。

    一种促进裂殖壶菌产油脂的方法

    公开(公告)号:CN107177640A

    公开(公告)日:2017-09-19

    申请号:CN201710548502.1

    申请日:2017-07-06

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 何宁 孟彤 李志朋

    CPC classification number: C12P7/6427

    Abstract: 本发明公开了一种促进裂殖壶菌产油脂的方法,在裂殖壶菌的发酵培养基中一次添加终浓度为100mg/L~3g/L的苯甲酸对位衍生物,添加苯甲酸对位衍生物的时机为发酵培养开始至发酵培养结束前1~2d中的任意时间。本发明的通过在发酵培养基中添加适量苯甲酸对位衍生物中的苯甲酸钠相较于裂殖壶菌在原始培养基中油脂产量提高了32.12%,添加对甲基苯甲酸油脂产量提高了38.21%,叶酸的添加使油脂产量提高了56.84%,对氨基苯甲酸使油脂产量提高了66.51%,但这类物质的添加对ω‑3PUFA并无抑制作用。

    一种利用沼液耦合微藻积累碳水化合物的方法

    公开(公告)号:CN105603019A

    公开(公告)日:2016-05-25

    申请号:CN201610064470.3

    申请日:2016-01-29

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: Y02E50/17 Y02E50/343 C12P19/00 C12N1/12 C12P7/06

    Abstract: 一种利用沼液耦合微藻积累碳水化合物的方法,涉及碳水化合物。利用平板划线法于固体培养基上保存微藻;从微藻平板上划取微藻,接入到Modified 3N medium培养液中培养,得微藻种子培养液;利用生物量与OD685之间存在正比关系,建立OD685与生物量之间的标准曲线;从厌氧发酵罐中取沼液,离心后取上清液;将上清液稀释,并转移到间歇式光反应器中,接种培养,定期测定微藻生物量和营养物质变化,评价实验效果;收集微藻,再经冷冻干燥、破碎、水浴、水解后,测定微藻中的碳水化合物含量。沼液耦合微藻培养,不仅降低微藻培养的成本,同时净化沼液废水;碳水化合物发酵可产生生物乙醇,实现沼液的资源化利用与能源再生。

    增塑剂二甘醇二苯甲酸酯的制备方法

    公开(公告)号:CN103086891B

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201310058116.6

    申请日:2013-02-22

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 增塑剂二甘醇二苯甲酸酯的制备方法,涉及一种增塑剂制备方法。将苯甲酸和二甘醇加热至苯甲酸溶解后,再加入催化剂回流反应,开启真空泵,升温至200~220℃时减压保温反应,待无水分蒸出后停止反应,得到二甘醇二苯甲酸酯粗品;将得到的二甘醇二苯甲酸酯粗品冷却后用Na2CO3水溶液中和除去过量的苯甲酸,洗涤后分出酯层,再减压蒸馏脱水,得到无色透明油状液体,即为增塑剂二甘醇二苯甲酸酯产品。工艺简单,不使用带水剂,在负压下反应将水不断蒸出,打破了酯化反应化学平衡,缩短了反应时间,大大提高了苯甲酸转化率,酯化率达98%以上,催化剂选择性好,副反应少,产品色泽浅,无需用活性炭脱色,既能适应工业化生产要求又环保。

    一种以剩余污泥发酵液为底物合成聚羟基脂肪酸酯的方法

    公开(公告)号:CN102505025B

    公开(公告)日:2014-09-24

    申请号:CN201110394695.2

    申请日:2011-12-02

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: Y02W10/27

    Abstract: 一种以剩余污泥发酵液为底物合成聚羟基脂肪酸酯的方法,涉及聚羟基脂肪酸酯的合成方法。将城市好氧活性污泥投入污泥驯化器中,按进水-好氧曝气-排泥-沉淀-出水为1个驯化周期进行驯化,好氧曝气时控制曝气量为1~3L/L/min,连续驯化18~22个周期,得驯化稳定的活性污泥;将城市剩余污泥放入反应器中,再加入氢氧化钠,热碱预处理后,调节pH值至中性,再接种厌氧污泥,搅拌下进行厌氧发酵,分离得挥发性脂肪酸发酵液;将驯化稳定的活性污泥于合成反应器中,加入挥发性脂肪酸发酵液进行污泥合成聚羟基脂肪酸酯,调pH值为中性,在间歇曝气条件下,添加乙酸钠为外加碳源,进行聚羟基脂肪酸酯的合成。

    一种利用表面活性剂强化的地下水修复方法

    公开(公告)号:CN103896391A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201410154753.8

    申请日:2014-04-17

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: Y02W10/15

    Abstract: 一种利用表面活性剂强化的地下水修复方法,涉及地下水处理。提供可解决地下水曝气过程中空气孔道分布不均匀,污染物难以从土壤脱离等问题,可提高系统的修复效率的一种利用表面活性剂强化的地下水修复方法。1)在地下水污染区域打至少1口曝气井;2)在地下水不饱和区域打至少1口抽提井;3)将表面活性剂由注入泵通过曝气井注入地下水中;4)开启抽提泵,使不饱和区形成负压;5)开启曝气泵,向地下水中曝入空气。利用混合的生物表面活性剂水溶液通过注入泵打入地下水曝气装置的每个曝气井中,以实现污染地下水修复中的物理脱除和微生物降解双重强化和耦合的效果。不需单独设置表面活性剂注入井,直接利用现有的曝气井即可实现,操作简便。

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