公开(公告)号：CN110804660B

公开(公告)日：2022-06-07

申请号：CN201911167258.X

申请日：2017-03-06

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  董卫华 ,  张俊河 ,  高建辉 ,  姚朝阳 ,  倪天军

IPC: C12Q1/6886

Abstract: 本发明公开了一种用于检测与结直肠癌长春新碱耐药相关的miRNA表达的引物、试剂盒、方法及应用，属于肿瘤生物治疗技术领域。本发明首次通过试验证实SEQ ID NO:1所示miRNA序列与长春新碱的耐药性相关，miRNA在长春新碱耐药细胞中高表达、敏感细胞中低表达，因此可以作为肿瘤细胞长春新碱耐药的标志物。根据该标志物设计的引物、试剂盒及检测方法可用于临床判断肿瘤细胞对长春新碱的耐药性，进一步指导临床用药并实现精准治疗，提高疗效，降低副作用。本发明为设计肿瘤细胞长春新碱耐药药物提供了新的靶点，可用于直接开发拮抗肿瘤细胞长春新碱耐药性的药物。

公开(公告)号：CN114561413A

公开(公告)日：2022-05-31

申请号：CN202210301557.3

申请日：2022-03-24

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 董卫华 ,  王天云 ,  张俊河 ,  郭潇 ,  米春柳 ,  耿少雷 ,  林艳

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及一种瞬时转染试剂及其应用，属于细胞生物学和生物技术领域。本发明的瞬时转染试剂，包括聚乙烯亚胺盐酸盐溶液、氯化钠溶液和氯化镁溶液；聚乙烯亚胺盐酸盐溶液的浓度为0.8～1.2mg/mL，pH为6.9～7.1，聚乙烯亚胺盐酸盐为PEI MAX 40K；氯化钠溶液的浓度为4.8～5.3mol/L；氯化镁溶液的浓度为0.8～1.2mol/L。本发明的瞬时转染试剂用于细胞转染时，具有较高的转染效率。由于聚乙烯亚胺盐酸盐的浓度较低，本发明的瞬时转染试剂具有较低的毒性。本发明的瞬时转染试剂是一种价廉、毒性小、转染效率高的瞬时转染试剂，可用于重组蛋白生产和基因治疗等方面。

公开(公告)号：CN114438124A

公开(公告)日：2022-05-06

申请号：CN202210102633.8

申请日：2022-01-27

Applicant: 新乡医学院 ,  河南普诺易生物制品研究院有限公司

Inventor： 张俊河 ,  王天云 ,  杨雯雯 ,  董卫华 ,  张玺 ,  王小引 ,  肖云喜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明属于重组蛋白筛选系统的构建领域，具体涉及一种CHO细胞蛋白表达系统用表达载体及CHO细胞的筛选方法。本发明的表达载体含有启动子、F2A序列和Poly A序列，在所述F2A序列的上游插入有目的基因，下游插入有荧光标记和筛选标记融合基因；所述F2A序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的上述表达载体，下游荧光标记基因的表达与上游目的基因的表达呈正相关，可利用荧光显微镜直观观察荧光标记基因的表达量，进而可以通过荧光强度强弱确定生长旺盛、表达量高的细胞株，利用半固体培养基更能方便该类细胞株的克隆筛选。

公开(公告)号：CN112592388A

公开(公告)日：2021-04-02

申请号：CN202011476275.4

申请日：2020-12-14

Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 ,  新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  林艳 ,  张俊河 ,  张继红 ,  樊振林 ,  米春柳 ,  杨献军

IPC: C07K14/09 ,  C07K14/095 ,  C12N15/85 ,  C07K16/24

Abstract: 本发明涉及一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用。本发明提供了一种2A肽(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3)，提供了含有所述2A肽编码基因的双顺反子表达载体及其构建方法，并通过构建含有所述2A肽的重组蛋白表达系统，将其应用于重组蛋白的表达，可以实现2个目的基因在哺乳动物细胞的高效表达。试验证明，在同等条件下，与其他2A肽比较，本发明提供的基于E2A和F2A的重组蛋白表达系统能够显著提高哺乳动物细胞重组蛋白的稳定表达水平，可广泛应用于制备各种目的蛋白，特别是抗体的制备。为改善哺乳动物细胞表达系统，进一步提高重组蛋白的表达量、增强细胞株的稳定性、降低生产成本奠定了基础。

公开(公告)号：CN106497973B

公开(公告)日：2019-05-17

申请号：CN201611019369.2

申请日：2016-11-18

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王小引 ,  王天云 ,  张玺 ,  王俐 ,  李琴 ,  王芳 ,  张俊河 ,  林艳 ,  付笑笑

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明公开了一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。该附着体表达载体上插入有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的分段β‑干扰素MAR序列(或者与该序列95％以上同源的核苷酸序列)，相较包含全长MAR序列或387bp MAR序列的表达载体，该载体能高效、持续、稳定地表达外源目的基因，尤其是包含E段MAR序列的载体表达最佳，可用于基因治疗。在该载体中，分段MAR序列插入载体的多克隆位点也即eGFP下游处，一方面能克服转基因沉默，另一方面能提高目的蛋白的表达水平以及后续单克隆细胞株筛选的有效性。

公开(公告)号：CN106520832A

公开(公告)日：2017-03-22

申请号：CN201611024593.0

申请日：2016-11-17

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  贾岩龙 ,  郭潇 ,  王稳 ,  陈思佳 ,  王俐 ,  张俊河 ,  李琴 ,  田政伟 ,  徐丹华

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/67 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因-IRES序列-筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR-启动子-目的基因-IRES序列-筛选标记-PolyA-MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。

公开(公告)号：CN103642838A

公开(公告)日：2014-03-19

申请号：CN201310642325.5

申请日：2013-11-29

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 张俊河 ,  王天云 ,  董卫华 ,  王芳 ,  赵春澎 ,  柴树洁 ,  王小引 ,  王俐 ,  杨瑞 ,  李琴

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了一种人类及哺乳动物细胞表达载体及其应用，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.1或Seq ID No.2所示，其是以pCAT3-control作为出发载体构建的一种表达载体，本发明的表达载体能够显著提高所携带目的基因的表达水平，同等条件下，比含MAR且不含EGFP的表达载体可显著提高目的基因的表达。