公开(公告)号：CN107557391A

公开(公告)日：2018-01-09

申请号：CN201710877467.8

申请日：2017-09-25

Applicant: 山东信得科技股份有限公司 ,  青岛信得药业有限公司

Inventor： 李明义 ,  于泽坤 ,  刘阳 ,  单学强 ,  孙化露 ,  李思菲 ,  栾志舫 ,  马礼照 ,  段笑笑 ,  吴海燕 ,  朱岩丽

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明公开了一种基于Nectin4受体的犬瘟热敏感细胞系建立方法，包括以下步骤：(1)样品总RNA提取及cDNA合成；(2)Nectin4基因的扩增、克隆；(3)Nectin4基因修饰；(4)dNectin4-Hatag的连接转化及重组质粒提取；(5)重组慢病毒包装；(6)细胞转染与阳性细胞株的筛选。通过本发明的方法构建的Vero-Nectin4能够稳定的表达稳定表达Nectin4受体，通用性好，CDV强毒株能够在该细胞系内生长并获得明显的CPE病变，适合在培养或分离犬瘟热病毒中推广应用。

公开(公告)号：CN107418973A

公开(公告)日：2017-12-01

申请号：CN201710388557.0

申请日：2017-05-27

Applicant: 山东信得科技股份有限公司 ,  青岛信得药业有限公司

Inventor： 李明义 ,  孙化露 ,  金红岩 ,  李思菲 ,  于泽坤 ,  毕云英 ,  刘阳 ,  单学强 ,  栾志舫 ,  马礼照 ,  李朝阳

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

CPC classification number: C12N15/85 ,  C12N7/00 ,  C12N2760/18121 ,  C12N2760/18122 ,  C12N2760/18152

Abstract: 本发明提供一种基因VII型新城疫病毒弱毒株的构建方法，是将VII型新城疫病毒的P蛋白的237位和240位的氨基酸分别突变为苏氨酸和异亮氨酸。本发明的方法构建的基因VII型新城疫病毒弱毒株制备的疫苗均能诱导产生较高的中和抗体，能抵抗强毒力基因VII型新城疫病毒的侵害，有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN104356211B

公开(公告)日：2017-08-29

申请号：CN201410485475.4

申请日：2014-09-22

Applicant: 山东信得科技股份有限公司

Inventor： 李明义 ,  单学强 ,  刘阳 ,  李晓林 ,  张伦 ,  冯晶晶 ,  李佳棋 ,  李朝阳 ,  乔彦良

IPC: C07K14/08 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明公开了一种应用Triton X‑114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入1ml Triton X‑114，充分混溶得到混合物A，将混合物A冰浴30min；混合物A在37℃条件下水浴放置10min，搅拌；25℃条件下，将搅拌均匀的混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到上层水相中，得到混合物B，将混合物B在室温下震荡20min；25℃条件下，将震荡后的混合物B在5000g下离心5min，去除底层沉淀，保留上清溶液，上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。本方法具有处理量大、处理周期短、生产成本低、去除内毒素彻底，可将内毒素含量控制在畜禽临床应用标准范围内的优点，并且符合规模化生产的需求。

公开(公告)号：CN106754535A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201611261996.7

申请日：2016-12-31

Applicant: 山东信得科技股份有限公司 ,  青岛信得药业有限公司

Inventor： 李明义 ,  孙化露 ,  刘阳 ,  毕云英 ,  李思菲 ,  于泽坤 ,  马丽 ,  马礼照 ,  单学强 ,  颜瑞娟 ,  胡秀香 ,  李朝阳

IPC: C12N1/20 ,  C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  A61P31/14 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明提供一种弱毒肠炎沙门氏菌rSD株，其保藏编号为CGMCC NO.13346。本发明所提供的弱毒肠炎沙门氏菌用于制备重组疫苗株。本发明另一个方面提供一种重组肠炎沙门氏菌活载体疫苗株，其基因组中包含IBDV的VP2基因。其中一个重组肠炎沙门氏菌活载体疫苗株的保藏编号为CGMCC NO.13251。本发明提供的弱毒肠炎沙门氏菌作为宿主所构建的重组疫苗株遗传稳定性好，在普通培养基连续传代20代，插入的外源基因没有发生任何突变；重组菌不含任何抗性，这符合现代细菌活疫苗的发展趋势，安全性好，不用考虑抗生素残留。重组菌生长繁殖性能良好，没有因为外源基因的插入而影响细菌的增殖。

公开(公告)号：CN104560889A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201410673855.0

申请日：2014-11-21

Applicant: 山东信得科技股份有限公司

Inventor： 李明义 ,  张玉杰 ,  刘阳 ,  李晓林 ,  张伦 ,  冯晶晶 ,  李佳棋 ,  单学强 ,  王相芹 ,  朱浩 ,  葛栋 ,  罗济冠 ,  李世鑫 ,  李朝阳

IPC: C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供猪流行性腹泻病毒分离技术。本发明包括以下步骤：用支原体去除剂将Vero细胞的支原体去除，进行细胞培养；对培养后的细胞注入胰蛋白酶的猪流行性腹泻病毒滤液，静置培养，收集猪流行性腹泻病毒液。本发明猪流行性腹泻病毒滤液与去除支原体以后的Vero细胞相互作用，在胰蛋白酶的作用下，产生明显细胞病变效应的时间稳定，没有支原体对细胞的干扰，从而使得收获猪流行性腹泻病毒时，病毒滴度高。由以前的103.64半数组织培养感染剂量升高到105.38TCID50，提高了近2个滴度；细胞产生病变的时间推后，由以前的24-48h推迟到72h。

公开(公告)号：CN104513298A

公开(公告)日：2015-04-15

申请号：CN201410753079.5

申请日：2014-12-09

Applicant: 山东信得科技股份有限公司

Inventor： 李明义 ,  高江明 ,  刘阳 ,  冯晶晶 ,  单学强 ,  张伦 ,  赵航 ,  李佳琪 ,  孙化露

IPC: C07K14/08 ,  C12N15/40 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14

CPC classification number: C07K14/005 ,  C12N2720/00022 ,  C12N2720/00034

Abstract: 本发明的目的是提供一种表达鸡传染性法氏囊可溶性VP2-4-3多肽的方法，能够克服目前鸡传染性法氏囊可溶性VP2-4-3蛋白重组表达时主要以包涵体方式表达的问题，从而弥补现有技术的不足。本发明提供一种改造的鸡传染性法氏囊VP 2-4-3多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明优化获得的VP2-4-3抗原保持了其主要抗原性，且经过了细胞周质的加工和修饰过程，结构上比单纯的原核表达的包涵体更接近于原蛋白结构，抗原特异性更强。并且该抗原为分泌表达，抗原纯化无需裂解细胞，避免了内毒素的引入回避了内毒素去除程序。该抗原更适于低成本大规模工业化生产。