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公开(公告)号：CN104474540A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410515139.X
申请日：2014-09-29
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明提供一种噬菌体展示表达圆环病毒抗原疫苗的制备方法，包括以下步骤：提取猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)RNA，反转录，聚合酶链式反应(PCR)扩增获取猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因开放阅读框片段，并铆定定向插入T4噬菌体；利用免疫筛选的方法获取具有ORF2基因的T4噬菌体；经纯化后重新侵染X-Blue ST1(CCTCC M 2014397)宿主细胞；发酵培养获得的X-BlueST1宿主细胞，诱导表达灭活后培养物作为抗原；ELISA标定抗原效价，并用生理盐水倍比稀释抗原终浓度为107U/ml；1:2.5的比例加入疫苗佐剂，即为疫苗。本发明利用噬菌体表达猪圆环病毒Ⅱ型抗原并制备疫苗，避免了弱毒疫苗毒力返强风险，且采用发酵培养利于大规模工业化生产，成本远低于通过细胞培养的方式生产疫苗。
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公开(公告)号：CN104513298B
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201410753079.5
申请日：2014-12-09
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明的目的是提供一种表达鸡传染性法氏囊可溶性VP 2‑4‑3多肽的方法，能够克服目前鸡传染性法氏囊可溶性VP 2‑4‑3蛋白重组表达时主要以包涵体方式表达的问题，从而弥补现有技术的不足。本发明提供一种改造的鸡传染性法氏囊VP 2‑4‑3多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明优化获得的VP 2‑4‑3抗原保持了其主要抗原性，且经过了细胞周质的加工和修饰过程，结构上比单纯的原核表达的包涵体更接近于原蛋白结构，抗原特异性更强。并且该抗原为分泌表达，抗原纯化无需裂解细胞，避免了内毒素的引入回避了内毒素去除程序。该抗原更适于低成本大规模工业化生产。
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公开(公告)号：CN105348372A
公开(公告)日：2016-02-24
申请号：CN201510697228.5
申请日：2015-10-22
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
IPC: C07K14/03 , C07K16/08 , C12N15/38 , G01N33/569
CPC classification number: C07K14/005 , C07K16/085 , C12N2710/16722 , G01N33/56983 , G01N2333/032
Abstract: 本发明的目的是提供一种猪伪狂犬病毒的检测方法，本发明的方法使用针对氨基酸序列为SEQ ID NO:1的gE蛋白的高特异性单克隆抗体，基于该单抗建立的阻断ELISA方法具有特异性高、灵敏度强、无假阳检测的特点，从而为PR准确诊断提供科学的依据。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104356211A
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201410485475.4
申请日：2014-09-22
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
CPC classification number: C07K14/005 , C12N2720/00051
Abstract: 本发明公开了一种应用Triton X-114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入1ml Triton X-114，充分混溶得到混合物A，将混合物A冰浴30min；混合物A在37℃条件下水浴放置10min，搅拌；25℃条件下，将搅拌均匀的混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到上层水相中，得到混合物B，将混合物B在室温下震荡20min；25℃条件下，将震荡后的混合物B在5000g下离心5min，去除底层沉淀，保留上清溶液，上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。本方法具有处理量大、处理周期短、生产成本低、去除内毒素彻底，可将内毒素含量控制在畜禽临床应用标准范围内的优点，并且符合规模化生产的需求。
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公开(公告)号：CN103333916A
公开(公告)日：2013-10-02
申请号：CN201310120764.X
申请日：2013-04-02
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种适应鸡新城疫病毒增殖的BHK细胞系的建立方法以及在鸡新城疫病毒的增殖中的应用。本发明通过改进新城疫病毒培养方式、优化培养参数、筛选传代细胞，建立传代细胞疫苗生产工艺，生产工艺流程将大大简化，生产过程更加可控。
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公开(公告)号：CN104356211B
公开(公告)日：2017-08-29
申请号：CN201410485475.4
申请日：2014-09-22
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种应用Triton X‑114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入1ml Triton X‑114，充分混溶得到混合物A，将混合物A冰浴30min；混合物A在37℃条件下水浴放置10min，搅拌；25℃条件下，将搅拌均匀的混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到上层水相中，得到混合物B，将混合物B在室温下震荡20min；25℃条件下，将震荡后的混合物B在5000g下离心5min，去除底层沉淀，保留上清溶液，上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。本方法具有处理量大、处理周期短、生产成本低、去除内毒素彻底，可将内毒素含量控制在畜禽临床应用标准范围内的优点，并且符合规模化生产的需求。
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公开(公告)号：CN104560889A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201410673855.0
申请日：2014-11-21
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明提供猪流行性腹泻病毒分离技术。本发明包括以下步骤：用支原体去除剂将Vero细胞的支原体去除，进行细胞培养；对培养后的细胞注入胰蛋白酶的猪流行性腹泻病毒滤液，静置培养，收集猪流行性腹泻病毒液。本发明猪流行性腹泻病毒滤液与去除支原体以后的Vero细胞相互作用，在胰蛋白酶的作用下，产生明显细胞病变效应的时间稳定，没有支原体对细胞的干扰，从而使得收获猪流行性腹泻病毒时，病毒滴度高。由以前的103.64半数组织培养感染剂量升高到105.38TCID50，提高了近2个滴度；细胞产生病变的时间推后，由以前的24-48h推迟到72h。
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公开(公告)号：CN104513298A
公开(公告)日：2015-04-15
申请号：CN201410753079.5
申请日：2014-12-09
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
CPC classification number: C07K14/005 , C12N2720/00022 , C12N2720/00034
Abstract: 本发明的目的是提供一种表达鸡传染性法氏囊可溶性VP2-4-3多肽的方法，能够克服目前鸡传染性法氏囊可溶性VP2-4-3蛋白重组表达时主要以包涵体方式表达的问题，从而弥补现有技术的不足。本发明提供一种改造的鸡传染性法氏囊VP 2-4-3多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明优化获得的VP2-4-3抗原保持了其主要抗原性，且经过了细胞周质的加工和修饰过程，结构上比单纯的原核表达的包涵体更接近于原蛋白结构，抗原特异性更强。并且该抗原为分泌表达，抗原纯化无需裂解细胞，避免了内毒素的引入回避了内毒素去除程序。该抗原更适于低成本大规模工业化生产。
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