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公开(公告)号：CN105348372A
公开(公告)日：2016-02-24
申请号：CN201510697228.5
申请日：2015-10-22
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
IPC: C07K14/03 , C07K16/08 , C12N15/38 , G01N33/569
CPC classification number: C07K14/005 , C07K16/085 , C12N2710/16722 , G01N33/56983 , G01N2333/032
Abstract: 本发明的目的是提供一种猪伪狂犬病毒的检测方法，本发明的方法使用针对氨基酸序列为SEQ ID NO:1的gE蛋白的高特异性单克隆抗体，基于该单抗建立的阻断ELISA方法具有特异性高、灵敏度强、无假阳检测的特点，从而为PR准确诊断提供科学的依据。
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公开(公告)号：CN104356211A
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201410485475.4
申请日：2014-09-22
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
CPC classification number: C07K14/005 , C12N2720/00051
Abstract: 本发明公开了一种应用Triton X-114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入1ml Triton X-114，充分混溶得到混合物A，将混合物A冰浴30min；混合物A在37℃条件下水浴放置10min，搅拌；25℃条件下，将搅拌均匀的混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到上层水相中，得到混合物B，将混合物B在室温下震荡20min；25℃条件下，将震荡后的混合物B在5000g下离心5min，去除底层沉淀，保留上清溶液，上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。本方法具有处理量大、处理周期短、生产成本低、去除内毒素彻底，可将内毒素含量控制在畜禽临床应用标准范围内的优点，并且符合规模化生产的需求。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104356211B
公开(公告)日：2017-08-29
申请号：CN201410485475.4
申请日：2014-09-22
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种应用Triton X‑114和尿囊素去除重组蛋白质溶液中内毒素的方法，包括以下步骤：在100ml VP2重组蛋白质溶液中加入1ml Triton X‑114，充分混溶得到混合物A，将混合物A冰浴30min；混合物A在37℃条件下水浴放置10min，搅拌；25℃条件下，将搅拌均匀的混合物A在12000g下离心15min，移出上层水相；将用于去除内毒素的尿囊素直接加到上层水相中，得到混合物B，将混合物B在室温下震荡20min；25℃条件下，将震荡后的混合物B在5000g下离心5min，去除底层沉淀，保留上清溶液，上清液即为去除内毒素的VP2重组蛋白质溶液。本方法具有处理量大、处理周期短、生产成本低、去除内毒素彻底，可将内毒素含量控制在畜禽临床应用标准范围内的优点，并且符合规模化生产的需求。
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公开(公告)号：CN104560889A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201410673855.0
申请日：2014-11-21
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明提供猪流行性腹泻病毒分离技术。本发明包括以下步骤：用支原体去除剂将Vero细胞的支原体去除，进行细胞培养；对培养后的细胞注入胰蛋白酶的猪流行性腹泻病毒滤液，静置培养，收集猪流行性腹泻病毒液。本发明猪流行性腹泻病毒滤液与去除支原体以后的Vero细胞相互作用，在胰蛋白酶的作用下，产生明显细胞病变效应的时间稳定，没有支原体对细胞的干扰，从而使得收获猪流行性腹泻病毒时，病毒滴度高。由以前的103.64半数组织培养感染剂量升高到105.38TCID50，提高了近2个滴度；细胞产生病变的时间推后，由以前的24-48h推迟到72h。
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公开(公告)号：CN104888210B
公开(公告)日：2018-11-30
申请号：CN201510244210.X
申请日：2015-05-14
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明涉及猪圆环病毒2型基因工程亚单位口服疫苗的制备方法，包括以下步骤：1、序列合成；2、重组载体在大肠杆菌中的构建；3、重组载体在乳酸乳球菌MG1363中的构建；4、蛋白的表达，重组菌保存实验以及疫苗的制备。本发明具有以下有益效果：不需要对抗原进行特殊处理，避免了抗原纯化，减少抗原损失；优化基因序列，提高了抗原表达量；优化表达条件，解决了其他原核表达添加诱导剂对动物存在毒性问题以及高成本问题，并且避免了在表达过程中添加诱导剂增加污染几率和加大工作量；采用本发明的方法，成本低，效果显著；本发明采用口服疫苗，避免了常规注射疫苗所引起的应激及疫苗吸收问题。
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公开(公告)号：CN104888210A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510244210.X
申请日：2015-05-14
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明涉及猪圆环病毒2型基因工程亚单位口服疫苗的制备方法，包括以下步骤：1、序列合成；2、重组载体在大肠杆菌中的构建；3、重组载体在乳酸乳球菌MG1363中的构建；4、蛋白的表达，重组菌保存实验以及疫苗的制备。本发明具有以下有益效果：不需要对抗原进行特殊处理，避免了抗原纯化，减少抗原损失；优化基因序列，提高了抗原表达量；优化表达条件，解决了其他原核表达添加诱导剂对动物存在毒性问题以及高成本问题，并且避免了在表达过程中添加诱导剂增加污染几率和加大工作量；采用本发明的方法，成本低，效果显著；本发明采用口服疫苗，避免了常规注射疫苗所引起的应激及疫苗吸收问题。
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公开(公告)号：CN104474540A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410515139.X
申请日：2014-09-29
Applicant: 山东信得科技股份有限公司
Abstract: 本发明提供一种噬菌体展示表达圆环病毒抗原疫苗的制备方法，包括以下步骤：提取猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)RNA，反转录，聚合酶链式反应(PCR)扩增获取猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因开放阅读框片段，并铆定定向插入T4噬菌体；利用免疫筛选的方法获取具有ORF2基因的T4噬菌体；经纯化后重新侵染X-Blue ST1(CCTCC M 2014397)宿主细胞；发酵培养获得的X-BlueST1宿主细胞，诱导表达灭活后培养物作为抗原；ELISA标定抗原效价，并用生理盐水倍比稀释抗原终浓度为107U/ml；1:2.5的比例加入疫苗佐剂，即为疫苗。本发明利用噬菌体表达猪圆环病毒Ⅱ型抗原并制备疫苗，避免了弱毒疫苗毒力返强风险，且采用发酵培养利于大规模工业化生产，成本远低于通过细胞培养的方式生产疫苗。
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