一种琼胶酶融合酶工程菌株的构建方法

    公开(公告)号:CN111850019A

    公开(公告)日:2020-10-30

    申请号:CN201910331494.4

    申请日:2019-04-25

    Abstract: 本发明提供一种琼胶酶融合酶工程菌株的构建方法,包括以下步骤:S1、质粒提取得到重组质粒Aga0917-pMD19T和CBM13-pUC57-DH5α;S2、PCR扩增得到Aga0917基因片段和CBM13基因片段;S3、Aga0917基因片段和CBM13基因片段的重叠PCR得到Aga0917-CBM13;S4、Aga0917-CBM13的末端加A;S5、末端带A的Aga0917-CBM13与克隆载体进行连接,得到克隆载体溶液;S6、表达载体构建得到琼胶酶融合酶工程菌株。本发明提出的构建方法,具有应用价值,且得到的琼胶酶融合酶工程菌株酶活性高、耐热性能优越、适用范围广,易应用于工业化生产中。

    一种木聚糖酶杂合酶工程菌株的构建方法

    公开(公告)号:CN105505806B

    公开(公告)日:2019-03-01

    申请号:CN201610046663.6

    申请日:2016-01-16

    Abstract: 本发明公开了一种木聚糖酶杂合酶工程菌株的构建方法,首先利用生物信息学比对木聚糖酶XynZF‑2基因序列与耐热木聚糖酶EvXyn11基因序列的同源性,通过N‑端替换将XynZF‑2的N‑端48个氨基酸替换成木聚糖酶EvXyn11N‑端的34个氨基酸,并引入芳香族氨基酸P9Y和H14F,进而在XynZF‑2酶C端继续引入二硫键Cys38‑Cys191、α‑螺旋及cord区域分别引入疏水性氨基酸K164M、G166A、N160I以及V111A、G109A,最后引入糖基化修饰位点E42N和F17S,构建多位点突变杂合酶XynZL,期望杂合酶XynZL的热稳定性有所改善。

    生产天麻素的重组基因工程菌、构建方法及应用

    公开(公告)号:CN113604414A

    公开(公告)日:2021-11-05

    申请号:CN202110965736.2

    申请日:2021-08-23

    Abstract: 本发明属于生物工程技术领域,具体涉及生产天麻素的重组基因工程菌、构建方法及应用。本发明重组基因工程菌,在宿主中引入糖基转移酶通过宿主菌株表达糖基转移酶催化底物合成天麻素的同时,又在宿主中引入蔗糖合酶和多聚磷酸激酶,实现UDPG的合成和循环再生,增加糖基化反应的糖基供体量,构建一种全细胞催化转化方法,在无额外UPDG加入的基础上,天麻素转化率高达95%以上,提高天麻素产量,降低天麻素生产成本。

    一种通过冷冻干燥浓缩质粒的方法

    公开(公告)号:CN108531476B

    公开(公告)日:2021-10-29

    申请号:CN201810323393.8

    申请日:2018-04-05

    Abstract: 本发明公开了一种通过冷冻干燥浓缩质粒的方法,包括以下步骤:按照小提质粒试剂盒要求提取质粒,最终用100μLddH2O洗脱到1.5mL EP管中;使用超微量分光光度计NANO DROP测量质粒浓度;将测量好的质粒打开盖子封上一层封口膜,放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥;同一种质粒用定量的ddH2O重溶,保证双蒸水充分接触到干燥后质粒液体形成的薄膜,且完全将该薄膜溶解;用超微量分光光度计NANO DROP测量质粒浓度;对比冷冻干燥前后质粒体,浓度和质量的变化,整理数据,统计前后质粒浓度体积变化的规律。本发明的方法稳定性强,该方法也同样适用于其他浓度较低的核酸产物的浓缩。

    一种嵌合体木聚糖酶XynZT-1-Z5及其构建方法

    公开(公告)号:CN119639722A

    公开(公告)日:2025-03-18

    申请号:CN202411922287.3

    申请日:2024-12-25

    Abstract: 本发明公开了一种嵌合体木聚糖酶XynZT‑1‑Z5及其构建方法,涉及分子生物学技术领域,其技术要点为:通过将木聚糖酶XynZT‑1与不同耐热菌来源的木聚糖酶的序列进行比对,分析其氨基酸保守位点,将耐热菌的序列β5‑β6替换到XynZT‑1上,得到嵌合酶XynZT‑1‑Z5,该嵌合酶具有高效的过表达、良好的溶解性、较强的温度和pH稳定性,尤其适用于需要高温、极端pH条件下的工业酶催化反应,能在食品行业、酿酒行业、造纸行业及饲料行业中广泛运用。

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