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公开(公告)号：CN110343699A
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201810316670.2
申请日：2018-04-08
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/67
Abstract: 本发明涉及用于提高哺乳动物细胞转基因表达的调控序列、表达载体、表达系统及其应用，属于基因工程技术领域。本发明根据CMV启动子、增强子的序列特征，结合生物学信息及实验，发明了3种用于组合启动子的调控序列，分别为人CMV启动子核心序列(hCPE)、合成的调控元件(SEE)、人巨细胞病毒即早期增强子(hCMVE)，将这三种调控序列插入表达载体的启动子上游，可以驱动外源基因高效、持续、稳定表达。同等条件下，与不含上述调控序列的表达载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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公开(公告)号：CN107868781A
公开(公告)日：2018-04-03
申请号：CN201711132142.3
申请日：2017-11-15
Applicant: 新乡医学院
CPC classification number: C12N15/11 , C12N15/85 , C12N2830/46
Abstract: 本发明涉及人工合成MAR片段、表达载体、表达系统及其应用，属于生物技术领域。新型人工合成MAR片段，分别为MAR-1、MAR-2、MAR-3，本发明的MAR片段是在分析β-珠蛋白MAR序列、X-29序列、β-干扰素MAR序列、MAR 1-68序列的基础上，根据其共有的序列特征设计合成了的新型MAR片段，研究发现MAR-1、MAR-2、MAR-3同时用于CHO细胞中外源蛋白的表达时，MAR-1的效果最好，外源蛋白的表达量与不含有MAR片段的系统相比可提高稳定细胞池5.04-5.47倍，更优选的为MAR-1片段所构成的8个拷贝的串联重复子DNA片段，具有更好的提高表达量的能力。
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公开(公告)号：CN119876267A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202510105426.1
申请日：2025-01-23
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及提高重组蛋白表达水平的方法、基因工程细胞、试剂盒、表达系统。本发明筛选验证miR‑21‑5p可以作为哺乳动物细胞（具体为CHO细胞）的基因工程改造靶点，构建miR‑21‑5p过表达的重组蛋白稳定表达系统，可以提高重组蛋白表达量；进一步的，本发明创造性的将miR‑21‑5p和miR‑92a‑3p联合作为基因工程改造靶点，通过构建miR‑21‑5p过表达、miR‑92a‑3p表达抑制的重组蛋白稳定表达系统，相比单靶点构建的表达系统，能够更进一步提高重组蛋白表达量。
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公开(公告)号：CN119552840A
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202411778307.4
申请日：2024-12-05
Applicant: 新乡医学院 , 常州南京大学高新技术研究院
Abstract: 本发明提供了过表达Tgm2基因的重组载体、重组CHO细胞及其在提高外源重组蛋白表达中的应用，属于基因工程技术领域，本发明创造性发现编码转谷氨酰胺酶2的基因Tgm2具有提高哺乳动物细胞中外源重组蛋白表达水平的作用，本发明将基因Tgm2过表达载体转染至CHO细胞构建过表达Tgm2的CHO细胞系，该CHO细胞系能够显著提高Tgm2的mRNA和蛋白表达水平，同时该CHO细胞系作为重组蛋白表达用宿主细胞，相比野生型CHO细胞系，能够提升重组蛋白表达量，有效的克服了目前CHO细胞表达系统存在的表达水平较低的问题。
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公开(公告)号：CN106520832B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因‑IRES序列‑筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR‑启动子‑目的基因‑IRES序列‑筛选标记‑PolyA‑MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106544361B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201611109050.9
申请日：2016-12-02
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MAR‑启动子‑外源基因‑Poly A、启动子‑外源基因‑Poly A‑TOP1 MAR或者TOP1 MAR‑启动子‑外源基因‑Poly A‑TOP1 MAR载体结构，一方面克服转基因沉默，另一方面介导外源基因在宿主细胞中稳定、高效、持久表达。同等条件下，与不含MAR以及含1‑68 MAR的载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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公开(公告)号：CN106544361A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201611109050.9
申请日：2016-12-02
Applicant: 新乡医学院
CPC classification number: C12N15/85 , C12N2800/107
Abstract: 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MAR-启动子-外源基因-Poly A、启动子-外源基因-Poly A-TOP1 MAR或者TOP1 MAR-启动子-外源基因-Poly A-TOP1 MAR载体结构，一方面克服转基因沉默，另一方面介导外源基因在宿主细胞中稳定、高效、持久表达。同等条件下，与不含MAR以及含1-68 MAR的载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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公开(公告)号：CN106520832A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因-IRES序列-筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR-启动子-目的基因-IRES序列-筛选标记-PolyA-MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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公开(公告)号：CN119709864A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411913965.X
申请日：2024-12-24
Applicant: 新乡医学院 , 常州南京大学高新技术研究院
IPC: C12N15/85 , C12N15/67 , C12N15/64 , C12N15/113 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了Aars1基因在调控外源重组蛋白表达中的应用，属于重组蛋白表达、基因工程及细胞培养技术领域。本发明将靶向Aars1基因的shRNA片段插入整合到piggyBac转座子载体中，构建得到了抑制/沉默Aars1基因的重组载体和Aars1低表达的CHO细胞系，该CHO细胞系能够显著降低Aars1的mRNA表达水平，同时该CHO细胞系作为重组蛋白表达用宿主细胞，相比野生型CHO细胞系，能够提升重组蛋白表达量(重组阿达木单抗表达量增加了3.1±0.18倍)，有效的克服了目前CHO细胞表达系统表达水平较低的问题，可用于进一步构建重组蛋白表达系统或试剂盒。
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公开(公告)号：CN119552877A
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202411785925.1
申请日：2024-12-06
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/12 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C07K14/765 , C07K16/24
Abstract: 本发明涉及重组蛋白表达及细胞培养技术领域。本发明提供了ANXA1基因作为重组蛋白表达调控靶点的应用以及调控该基因核酸片段、质粒和制备获得的CHO细胞系。本发明通过沉默/抑制CHO细胞ANXA1基因表达，调控细胞增殖能力，提升重组蛋白产量；具体将靶向ANXA1基因的shRNA片段插入整合到piggyBac转座子载体中，构建shRNA转座子载体；通过PBase持续高效催化shRNA转座子载体整合到CHO细胞的基因组中，实现CHO细胞中该基因的持续干扰效果。本发明构建的CHO细胞系能够显著降低ANXA1的mRNA和蛋白表达水平，作为重组蛋白表达用宿主细胞，成倍提升重组蛋白表达量。
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