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公开(公告)号：CN107058387B
公开(公告)日：2019-09-06
申请号：CN201710240457.3
申请日：2017-04-13
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种适合HEK293细胞的双顺反子表达载体及其制备方法、表达系统、应用，属于基因工程技术领域。本发明的适合HEK293细胞的双顺反子表达载体，包含如下元件：第一核基质结合区序列‑启动子‑目的基因‑内部核糖体进入位点序列‑筛选标记基因‑Poly A–第二核基质结合区序列。该载体利用优化的MAR序列可以显著提高HEK293细胞转基因表达，克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。同时可实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记基因表达不均衡的问题。
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公开(公告)号：CN109628489A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201910012271.1
申请日：2019-01-07
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/67 , C12N15/113
CPC classification number: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/65 , C12N15/67 , C12N2310/141
Abstract: 本发明涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明中的方法应用CHO细胞内源miRNAs与3′‑UTR转录区互补结合来对筛选标记基因表达进行负性调节，进而提高目的基因的表达量。将miRNAs与3′‑UTR转录区克隆到筛选标记基因的下游，构建真核表达载体；然后将目的基因克隆到真核表达载体获得重组表达载体，然后将其转染细胞，获得CHO细胞表达系统，实现目的基因的高效表达。本发明的CHO细胞表达系统，可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的高产量稳定表达。
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公开(公告)号：CN106497973A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201611019369.2
申请日：2016-11-18
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/85
CPC classification number: C12N15/85 , C12N2800/107
Abstract: 本发明公开了一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。该附着体表达载体上插入有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的分段β-干扰素MAR序列(或者与该序列95％以上同源的核苷酸序列)，相较包含全长MAR序列或387bp MAR序列的表达载体，该载体能高效、持续、稳定地表达外源目的基因，尤其是包含E段MAR序列的载体表达最佳，可用于基因治疗。在该载体中，分段MAR序列插入载体的多克隆位点也即eGFP下游处，一方面能克服转基因沉默，另一方面能提高目的蛋白的表达水平以及后续单克隆细胞株筛选的有效性。
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公开(公告)号：CN102703503B
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201210180788.X
申请日：2012-06-01
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明提供了一种人类和哺乳动物细胞附着表达载体，所述表达载体中含有核基质附着区序列，所述核基质附着区序列如Seq ID No.1所示，或与该序列95％以上同源的核苷酸序列。该载体能够介导外源基因在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达，且安全性能好，可用于基因治疗，具有广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN102703503A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210180788.X
申请日：2012-06-01
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明提供了一种人类和哺乳动物细胞附着表达载体，所述表达载体中含有核基质附着区序列，所述核基质附着区序列如Seq ID No.1所示，或与该序列95％以上同源的核苷酸序列。该载体能够介导外源基因在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达，且安全性能好，可用于基因治疗，具有广阔的市场前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119431608A
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202411915085.6
申请日：2024-12-24
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及重组蛋白表达技术领域，尤其涉及一种重组人源III型胶原蛋白及其制备方法与应用。本发明提供了一种重组人源III型胶原蛋白，所述重组人源III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明制备的重组人源III型胶原蛋白可以更好地应用于人体中，更好地发挥其生物学功能，同时避免排斥作用，安全性高，可以有效促进细胞增殖和抗氧化，且表达产量高、批次间稳定、质量好；本发明制备的重组人源III型胶原蛋白有能够应用于生物医药和化妆品的制备和生产的潜力。
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公开(公告)号：CN114807145B
公开(公告)日：2024-02-20
申请号：CN202210619725.3
申请日：2022-06-02
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/12 , C12N15/53 , C12N15/13
Abstract: 本发明提供了一种提高非帽子依赖翻译效率的前导序列及其应用，属于基因工程技术领域。所述前导序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的前导序列能有效提高瞬时哺乳细胞表达系统中非帽子依赖内部核糖体进入位点(internalribozymeentrysite，IRES)元件介导的目的基因的表达量。
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公开(公告)号：CN114807145A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210619725.3
申请日：2022-06-02
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/12 , C12N15/53 , C12N15/13
Abstract: 本发明提供了一种提高非帽子依赖翻译效率的前导序列及其应用，属于基因工程技术领域。所述前导序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的前导序列能有效提高瞬时哺乳细胞表达系统中非帽子依赖内部核糖体进入位点(internalribozymeentrysite，IRES)元件介导的目的基因的表达量。
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公开(公告)号：CN114561413A
公开(公告)日：2022-05-31
申请号：CN202210301557.3
申请日：2022-03-24
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种瞬时转染试剂及其应用，属于细胞生物学和生物技术领域。本发明的瞬时转染试剂，包括聚乙烯亚胺盐酸盐溶液、氯化钠溶液和氯化镁溶液；聚乙烯亚胺盐酸盐溶液的浓度为0.8～1.2mg/mL，pH为6.9～7.1，聚乙烯亚胺盐酸盐为PEI MAX 40K；氯化钠溶液的浓度为4.8～5.3mol/L；氯化镁溶液的浓度为0.8～1.2mol/L。本发明的瞬时转染试剂用于细胞转染时，具有较高的转染效率。由于聚乙烯亚胺盐酸盐的浓度较低，本发明的瞬时转染试剂具有较低的毒性。本发明的瞬时转染试剂是一种价廉、毒性小、转染效率高的瞬时转染试剂，可用于重组蛋白生产和基因治疗等方面。
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公开(公告)号：CN112592388A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011476275.4
申请日：2020-12-14
Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 , 新乡医学院
IPC: C07K14/09 , C07K14/095 , C12N15/85 , C07K16/24
Abstract: 本发明涉及一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用。本发明提供了一种2A肽(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3)，提供了含有所述2A肽编码基因的双顺反子表达载体及其构建方法，并通过构建含有所述2A肽的重组蛋白表达系统，将其应用于重组蛋白的表达，可以实现2个目的基因在哺乳动物细胞的高效表达。试验证明，在同等条件下，与其他2A肽比较，本发明提供的基于E2A和F2A的重组蛋白表达系统能够显著提高哺乳动物细胞重组蛋白的稳定表达水平，可广泛应用于制备各种目的蛋白，特别是抗体的制备。为改善哺乳动物细胞表达系统，进一步提高重组蛋白的表达量、增强细胞株的稳定性、降低生产成本奠定了基础。
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