公开(公告)号：KR1019960005086B1

公开(公告)日：1996-04-20

申请号：KR1019920011016

申请日：1992-06-24

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 반재구 ,  한문희 ,  김정하 ,  정흥채

IPC: C12N1/20

Abstract: When pseudomonas syringae(KCTC 1832) is cultivated in the fermentor including industrial microorganisms, yeast extract, soy pepton, and corn-steep liquor, the following processes can increase the productivity of the microorganism. (a) the process of limiting dissolved oxygen to 10-50 % with oxygen membrane; (b) the process of providing medium to maintain above 1% of glucose concentration; (c) the process of lowering culture temp. to 20-24 deg.C with dissolved oxygen maintained below 1ppm.

Abstract translation: 当在发酵罐中培育假单胞菌（KCTC 1832）时，包括工业微生物，酵母提取物，大豆蛋白和玉米浆，以下方法可以提高微生物的生产力。 （a）用氧气膜将溶解氧限制在10-50％的过程; （b）提供培养基以维持1％葡萄糖浓度的过程; （c）降低培养温度的过程 至20-24℃，溶解氧保持在1ppm以下。

公开(公告)号：KR100320784B1

公开(公告)日：2002-05-13

申请号：KR1019980037413

申请日：1998-09-10

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 신용철 ,  반재구 ,  염도영

IPC: C12N15/53

Abstract: 본 발명은 어위니아 허비콜라(Erwinia herbicola) 균주로부터 분리한 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소(2-keto-D-gluconate dehydrogenase) 유전자 염기서열 및 이 유전자를 세포내 대사과정이 없는 다른 균주에 도입하여 배양하므로써 재조합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소에 의해 2-케토-디-글루코네이트(2-keto-D-gluconate)를 2,5-다이케토-디-글루코네이트(2,5-diketo-D-gluconate)로 전환하는 방법에 관한 것으로 상기 어위니아 허비콜라 ATCC 08111 균주로부터 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 유전자를 클로닝 및 서브클로닝하여 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 유전자 염기서열을 결정한 후 이 유전자가 삽입된 재조합 플라스미드 pKI111를 대장균에 도입하므로써 대장균을 형질전환시킨 후 배양하여 형질전환된 대장균내에서 세� �막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 유전자를 발현시키므로써 재조합 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 활성에 의해 2-케토-디-글루코네이트를 2,5-다이케토-디-글루코네이트로 세포내 대사분해 없이 신속하게 전환할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.

公开(公告)号：KR100320370B1

公开(公告)日：2002-03-21

申请号：KR1019980039405

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

Abstract: 본 발명은 신규한 대장균 유래 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소(2,5-diketo-D-gluconate reductase)의 유전자 염기서열을 결정하고 이들 효소들의 유전자를 결손시켜 포도당 대사에 의한 비타민 C 제조시 중간산물의 세포내 대사를 저해하여 고수율로 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트(2-keto-L-gulonate) 생산에 관한 것으로 대장균으로부터 코리네박테리움 속(corynebacterium sp.) 미생물의 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소와 글루코노박터 옥시단스(gluconobacter oxydans)의 5-케토-디-글루코네이트 환원효소의 아미노산 배열과 유사성을 보이는 단백질의 유전자인
yqhE ,
yafB 및
yjgU 를 클로닝한 후 이들 유전자 산물의 효소 단백질을 정제한 후 효소활성을 측정하여 상기
yqhE 유전자는 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소를 코� �하고
yafB 유전자는 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소를 코딩하며
yjgU 유전자는 5-케토-디-글루코네이트 환원효소를 코딩하는 유전자임을 검증하므로써
yqhE 유전자,
yafB 유전자 및
yjgU 가 각기 코딩하는 대장균으로부터 유래된 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소, 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소 및 5-케토-디-글루코네이트 환원효소의 존재를 확인하고 이들 효소의 대사경로에 기초하여 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소의 유전자인
yafB 유전자를 결손시키므로써 대장균내 생물전환에 의한 2-케토-엘-글로네이트의 생산시에 중간산물인 2,5-다이케토-디-글루코네이트의 세포내 대사를 방지하여 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트의 생산수� �을 향상시키는 뛰어난 효과가 있다.

公开(公告)号：KR1020000020688A

公开(公告)日：2000-04-15

申请号：KR1019980039405

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

CPC classification number: C12N9/0012 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: A yafB gene that is a gene for 2-keto-D-gluconate producing 2,5-diketo-D-gluconate reductase is defected to prevent metabolism of 2,5-diketo-D-gluconate produced as an intermediate product in the production of 2-keto-L-glonate by transformation in E. coli, thereby production yield of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C is enhanced. CONSTITUTION: The yafB gene codes the 2,5-diketo-gluconate reductase gene for production of 2-keto-D-gluconate, which is originated from E. coli. The yafB gene is inserted into a recombinant plasmid pYAFB. The recombinant plasmid pYAFB with the yafB gene inserted thereinto is transformed in a coliform DH5alpha/pYAFB (KCTC 0509BP). In the production of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C from gluconate by glucose metabolism, the 2,5-diketo-D-gluconate reductive defective gene is introduced to a host cell to express a glucose reductive in a membrane-bound recombinant strain.

Abstract translation: 目的：作为2-酮-D-葡萄糖酸盐产生2,5-二酮-D-葡萄糖酸还原酶的基因的yafB基因被缺陷以防止作为中间产物产生的2,5-二酮-D-葡萄糖酸盐的代谢 通过在大肠杆菌中转化生产2-酮-L-聚糖，从而提高作为维生素C前体的2-酮-L-聚乙二醇的产率。 构成：yafB基因编码2,5-diketo葡萄糖酸还原酶基因，用于生产来源于大肠杆菌的2-酮-D-葡萄糖酸盐。 将yafB基因插入重组质粒pYAFB中。 将含有yafB基因的重组质粒pYAFB转化到大肠杆菌DH5α/ pYAFB（KCTC 0509BP）中。 在通过葡萄糖代谢产生作为葡萄糖酸的维生素C的前体的2-酮-L-聚乙二醇化时，将2,5-二酮-D-葡萄糖酸还原性缺陷基因导入宿主细胞，以在膜中表达葡萄糖还原 重组菌株。

公开(公告)号：KR100185335B1

公开(公告)日：1999-04-01

申请号：KR1019960009921

申请日：1996-04-02

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 반재구 ,  정홍채 ,  박승환 ,  한문희 ,  박영훈

IPC: C12N15/63

CPC classification number: C12N9/2437 ,  C07K14/21 ,  C12N15/78 ,  C12Y302/01004

Abstract: 본 발명은 그람음성 세균인 슈도모나스 시링계(Pseudomonas syringae)에서 유래한 세포외막 단백질인 빙핵활성 단백질(Ice Nucleation Protein, INP)을 이용하여, 외래 단백질을 세포 표면에 안정적으로 발현시키는 새로운 벡터, 세균의 표면에 외래단백질을 다량 발현시키는 제조방법 및 표면 발현된 외래단백질을 사용하는 용도를 제공함에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR100097214B1

公开(公告)日：1996-03-20

申请号：KR1019920007367

申请日：1992-04-30

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 성문희 ,  유향숙 ,  나도선 ,  박승길 ,  최윤호 ,  한문희 ,  반재구

IPC: C12N15/19

公开(公告)号：KR100320269B1

公开(公告)日：2002-04-22

申请号：KR1019980039404

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

Abstract: 본 발명은 신규한 대장균 유래 2-케토알도네이트 환원효소(2-ketoaldonate reductase)의 유전자 염기서열을 결정하고 이들 효소들의 유전자를 결손시켜 포도당 대사에 의한 비타민 C 제조시 중간산물의 세포내 대사를 저해하여 고수율로 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트(2-keto-L-gulonate) 생산에 관한 것으로 대장균으로부터 포스포그라이세레이트 탈수소효소(phosphoglycerate dehydrogenase)및 하이드록시피루베이트 환원효소(hydropyruvate reductase)와 유사성을 보이는
yiaE 유전자를 PCR 클로닝하고 클로닝한
yiaE 유전자의 효소 단백질 산물의 기질 특이성을 조사하여
yiaE 유전자가 2-케토알도네이트 환원효소를 코딩하는 유전자임을 검증하고 이 유전자의 염기서열을 결정한 후 상기 검증한 2-케토알도네이트 환원효소를 코딩하는
yiaE 유전자를 결손시킨 다음 대장균에 � ��입하여 재조합 대장균내에서 발현되는 2-케토알도네이트 환원효소 활성을 측정한 결과,
yiaE 유전자가 결손된 2-케토알도네이트 환원효소는 대장균내 생물전환에 의한 2-케토-엘-글로네이트의 생산시에 중간산물인 2-케토-디-글루코네이트, 2,5-다이케토-디-글루코네이트 및 최종산물인 2-케토-엘-글로네이트의 세포내 대사를 방지하여 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트의 생산수율을 향상시키는 뛰어난 효과가 있다.

公开(公告)号：KR100267505B1

公开(公告)日：2000-10-16

申请号：KR1019980031193

申请日：1998-07-31

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 반재구 ,  신수안 ,  박찬규 ,  장동은 ,  김재은 ,  김필

IPC: C12N1/20

CPC classification number: C12P7/46 ,  C12R1/19

Abstract: PURPOSE: A novel strain E. coli SS373 is obtained from the transformation by using genetic manipulation. And succinic acid is effectively manufactured by using it. CONSTITUTION: Transformed E. coli SS373 (KCTC 8818P) is obtained by genetic manipulation, that is, its metabolic pathway, in particular the synthesis pathway of acetic acid and lactic acid is deleted genetically. The manufacturing method of succinic acid comprises the steps of: primarily culturing transformed E. coli SS373 in carbon source containing medium under aerobic condition; then secondarily culturing the strain under anaerobic condition to produce succinic acid. Wherein the carbon source is characteristically not transferred by PTS(Phosphotransferase System).

Abstract translation: 目的：通过遗传操作从转化中获得新型菌株大肠杆菌SS373。 琥珀酸通过使用有效地制造。 构成：转基因大肠杆菌SS373（KCTC 8818P）是通过遗传操作获得的，即其代谢途径，特别是乙酸和乳酸的合成途径被遗传删除。 琥珀酸的制备方法包括以下步骤：在需氧条件下，在含碳源的培养基中主要培养转化的大肠杆菌SS373; 然后在厌氧条件下二次培养菌株以产生琥珀酸。 其中碳源的特征是不被PTS（Phosphotransferase System）转移。

公开(公告)号：KR1020000025930A

公开(公告)日：2000-05-06

申请号：KR1019980043230

申请日：1998-10-15

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 이정기 ,  문민우 ,  박순양 ,  반재구 ,  성문희 ,  오태광

IPC: C12N15/31

CPC classification number: C12N15/74 ,  A61K38/00 ,  C07K14/195

Abstract: PURPOSE: A novel catabolism control protein(CcpA) and DNA encoding the same are provided which induce a mutation discharging a catabolism repression phenotype, so it can be useful to construct the mutant which produces a hydrolysis enzyme regardless of a sugar composite ion in a fermentative medium. CONSTITUTION: Provided are a CcpA, DNA sequence encoding the same and a strong promoter thereof which is an inhibitory factor of enzyme production. DNA encoding the CcpA is described by SEQ ID NO. 1 and purified from Thermoactinomyces sp.. The CcpA is concerned in a catabolism repression as an inhibitory factor of enzyme production and regulates the synthesis of protein hydrolysis enzyme.

Abstract translation: 目的：提供一种新型的分解代谢控制蛋白（CcpA）和编码该DNA的DNA，其诱导排斥分解代谢阻遏表型的突变体，因此构建不产生糖复合离子的水解酶的突变体是有用的 中。 构成：提供了编码该酶的CcpA，DNA序列和作为酶生产的抑制因子的强启动子。 编码CcpA的DNA由SEQ ID NO： 1并从Thermoactinomyces sp。中纯化.CcpA涉及分解代谢抑制作为酶生产的抑制因子并调节蛋白质水解酶的合成。

公开(公告)号：KR1020000020687A

公开(公告)日：2000-04-15

申请号：KR1019980039404

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

CPC classification number: C12N9/0004 ,  C07K14/24 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: A yiaE gene that is a gene for 2-ketoaldonate reductase is defected to prevent metabolism of 2-keto-D-gluconate, 2,5-diketo-D-gluconate and 2-keto-L-glonate produced in production of 2-keto-L-glonate by transformation in coli, thereby production yield of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C is enhanced. CONSTITUTION: The yiaE gene codes a 2-ketoaldonate reductase gene, which is originated from E. coli. The yiaE gene is inserted into a recombinant plasmid pHD2. The recombinant plasmid pHD2 with the yiaE gene inserted thereinto is transformed in a coliform DH5alpha/pHD2 (KCTC 0507BP). In the production of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C from gluconate by glucose metabolism, the 2-ketoaldonate reductive defective gene is introduced to a host cell to express a glucose reductive in a membrane-bound recombinant strain.

Abstract translation: 目的：作为2-酮戊二醛还原酶基因的yiaE基因被缺陷，以防止2-酮-D-葡萄糖酸盐，2,5-二酮-D-葡萄糖酸盐和2-酮-L-葡萄糖酸盐的生成中产生的2-keto-L- 通过在大肠杆菌中转化，从而提高了作为维生素C前体的2-酮-L-聚乙二醇的产率。 构成：yiaE基因编码源自大肠杆菌的2-酮戊二醛还原酶基因。 将yiaE基因插入重组质粒pHD2中。 将插入有yiaE基因的重组质粒pHD2转化大肠杆菌DH5α/ pHD2（KCTC 0507BP）。 在通过葡萄糖代谢产生作为葡萄糖酸的维生素C的前体的2-酮-L-聚乙二醇化时，将2-酮戊二醛还原性缺陷基因导入宿主细胞，以在膜结合的重组菌株中表达葡萄糖还原。