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公开(公告)号：CN117070572B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202310810743.4
申请日：2023-07-04
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物合成二氢‑β‑紫罗兰酮的方法，包括将转化的第一宿主细胞在包含β‑紫罗兰酮的合适培养基中孵育足够的时间以将β‑紫罗兰酮转化为二氢‑β‑紫罗兰酮；其中，转化的第一宿主细胞包含合成的或重组的核酸分子，核酸分子包含编码青蒿来源的烯键还原酶AaDBR1的第一核苷酸序列以及编码NADPH再生酶的第二核苷酸序列。本发明首先构建生物合成β‑紫罗兰酮的萜类化合物前体的供应模块、β‑胡萝卜素合成模块以及β‑紫罗兰酮合成等三个模块，并对三大模块进行了重组优化，构建了优良的从头合成β‑紫罗兰酮的优良重组菌，为实现二氢‑β‑紫罗兰酮绿色、可持续的大量合成及作为天然产品的广泛应用提供了方法。
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公开(公告)号：CN118240790A
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410334541.1
申请日：2024-03-22
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶的氨基酸突变体及其应用，所述氨基酸突变体是将来源于黍Panicum hallii GT 1家族的糖基转移酶PhUGT氨基酸序列的第141位脯氨酸替换为甘氨酸获得；所述氨基酸突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过基因工程技术，对具有优良特性或具有一定转木糖基能力的葡萄糖基转移酶实施定向改造，通过单点突变法获得能高效转化芹菜素为芹菜素5‑O‑木糖苷的方法。本发明获得的新型氨基酸突变体专一性强，定向转化效率高，且创制了非天然的黄酮糖苷类化合物芹菜素5‑O‑木糖苷及其制备工艺。
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公开(公告)号：CN117247979A
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202311225587.1
申请日：2023-09-21
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12P17/06 , C12N11/089 , C12N11/14 , C12N9/24 , C12N9/42
Abstract: 本发明公开了一种双固定化酶联用制备淫羊藿素的方法，属于酶工程和生物工程技术领域。包括在缓冲体系中，将第一固定化酶与底物淫羊藿总黄酮反应；反应后移除第一固定化酶，并加入第二固定化酶继续反应，得到淫羊藿素；其中，所述第一固定化酶为α‑L‑鼠李糖苷酶DtRha与环氧基树脂载体通过共价键连接得到；所述固定化酶为多功能糖苷酶Tpebgl3由连接肽介导与沸石载体通过特异性吸附连接得到。本发明实现了将淫羊藿总黄酮全部转化为淫羊藿苷元，本发明大大缩短了淫羊藿苷元的制备工艺，提高了生产效率；且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂，降低了环境污染，适宜于工业化生产。
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公开(公告)号：CN117210449A
公开(公告)日：2023-12-12
申请号：CN202311263539.1
申请日：2023-09-27
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N11/089 , C12N9/24 , C12P19/60
Abstract: 本发明公开了一种固定化α‑L‑鼠李糖苷酶及其制备方法和应用，固定化α‑L‑鼠李糖苷酶包括环氧树脂载体和α‑L‑鼠李糖苷酶，所述α‑L‑鼠李糖苷酶与所述环氧树脂载体通过共价键连接；所述α‑L‑鼠李糖苷酶为粗酶；所述环氧树脂载体为ES‑107T或EG‑1环氧树脂。本发明通过固定化α‑L‑鼠李糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶两个酶的联用，实现直接从淫羊藿总黄酮到淫羊藿苷元的转化，本发明大大缩短了淫羊藿苷元的制备工艺，提高了生产效率；且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂，降低了环境污染，适宜于工业化生产。
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公开(公告)号：CN111117988A
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN202010059242.3
申请日：2020-01-18
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 嗜热木糖苷酶的氨基酸突变体及其应用。本发明突变了来源于嗜热网球菌（Dictyoglomus thermophilum）DSM 3960 GH 39家族的β-木糖苷酶，并利用β-木糖苷酶多位点突变体特异性水解三七皂苷R1生成人参皂苷Rg1。所述多位点突变体含有2个突变位点，其中HIS284分别突变为ASP和ALA，突变体使得该β-木糖苷酶耐糖率分别提高了1.35和1.09倍，其Ki系数分别达到了4.6 mol/L和3.7 mol/L；CYS202突变为LEU和PHE，其酶活分别提高了3.28和2.97倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118291420A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410576984.1
申请日：2024-05-10
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种葡萄糖基转移酶的氨基酸突变体及其应用，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明从南瓜（Cucurbita moschata）中克隆得到了一种GT 1家族的糖基转移酶基因CmGT，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，对该糖基转移酶进行关键位点突变，获得的新型糖基转移酶多位点突变体CmGT‑S16A‑T80W，其酶活提高了1.7倍。该突变体CmGT‑S16A‑T80W专一性强，能够高效特异性转化木犀草素生成木犀草素‑7‑O‑葡萄糖苷，催化活性较高。
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公开(公告)号：CN118240889A
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410334537.5
申请日：2024-03-22
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物催化转化槲皮素或芦丁生成柽柳黄素的方法，涉及酶工程及生物工程技术领域。本发明首次通过挖掘和鉴定，获得新型O‑甲基转移酶AaOMT，并通过菌酶催化耦合高效转化芦丁生成柽柳黄素，其生物催化剂独特、特异性强，技术路线新颖，制备过程时间短、成本低、清洁绿色。
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公开(公告)号：CN104726504B
公开(公告)日：2018-08-10
申请号：CN201510142163.8
申请日：2015-03-27
IPC: C12P7/26
Abstract: 本发明公开了一种5,5’‑去氢二香草乙酮的漆酶催化合成方法。包括如下步骤：将香草乙酮溶解于水或pH为3.5~6.0的缓冲溶液中，配制成溶液，控制温度在20~60°C，加入重组漆酶，于摇床中反应；反应结束后静置沉淀，洗涤沉淀物，于不高于50℃下干燥，得到产品5,5’‑去氢二香草乙酮。本发明的反应原料和重组漆酶本身均为天然产物，无毒，反应过程中利用空气中的氧，不需要添加其他氧化剂；本发明反应条件温和，室温下即可进行，产物单一，易于纯化，纯化步骤中不涉及酸碱等化学药剂，产品纯度高。
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公开(公告)号：CN104762281B
公开(公告)日：2017-11-17
申请号：CN201510102927.0
申请日：2015-03-09
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种α‑鼠李糖苷酶及其制备方法和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；该重组酶最适反应温度高、热稳定性好，在优选条件下可高效表达目的蛋白，因此可在选择性水解芦丁、橘皮苷、柚皮苷、樱桃苷、柴胡皂苷及其它连接α‑鼠李糖苷的黄酮类化合物或萜类香气前体化合物中的鼠李糖等领域中具有广泛的应用。
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公开(公告)号：CN107137440A
公开(公告)日：2017-09-08
申请号：CN201710211972.9
申请日：2017-04-01
Applicant: 南京林业大学
IPC: A61K36/258 , A61K31/704 , A61P35/00 , C12P1/00
CPC classification number: A61K36/258 , A61K31/704 , A61K2236/19 , C12P1/00 , A61K2300/00
Abstract: 一种抗肿瘤组合物及其制备方法和应用，属于抗肿瘤药物技术领域，该组合物由β‑葡萄糖苷酶降解三七总皂苷提取物而得。本发明提供的制备方法反应条件温和、副产物少、工艺操作简单，产品成分明确、质量可控。所制得的三七总皂苷转化物对乳腺癌、肝癌、结肠癌、肺癌等肿瘤增殖的抑制作用明显优于三七总皂苷提取物。
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